JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 3:02 dk • April 30th, 2023
Ortotopik inokülasyon, kanser hücrelerinin doku histotipine uyan bir organ veya bölgedeki bir alıcı hayvana verilmesini kolaylaştırır. Başlamak için, sırtüstü pozisyonda anestezi uygulanmış bağışıklığı baskılanmış çıplak bir fare hazırlayın.
Ardından, tükürük bezlerini ortaya çıkarmak için boyun bölgesinde cerrahi bir kesi yapın. Tükürük bezlerini yerinden çıkarın ve altta yatan trakea ve tiroid bezini ortaya çıkarmak için kayış kaslarını inceleyin.
Bir endokrin bezi olan tiroid bezi, soluk borusunun her iki yanında yer alan ve krikoid kıkırdağı çevreleyen iki lobdan oluşur. Bu iki lob, isthmus adı verilen ince bir tiroid dokusu şeridi ile birbirine bağlanır.
Şimdi, bir şırınga içinde uygun bir tampon ile tiroid kanseri hücrelerinin bir süspansiyonunu hazırlayın. Hücre süspansiyonunu farenin tiroid lobuna dikkatlice enjekte edin.
Daha sonra tükürük bezlerini yeniden konumlandırın ve kesiyi dikin. Farenin iyileşmesine izin verin. Tiroid lobundaki ortotopik tümörlerin büyümesini gözlemlemek için fareyi haftalık olarak izleyin.
Ortotopik tiroid tümör hücresi inosunasyonu için, 5 mikrolitre PBS'de Cal62 hücrelerinin bir alikotunu askıya alın ve 7 haftalık bir BALB/c çıplak fareye deri altından 100 mikrolitre analjezik ve 100 mikrolitre antibiyotik enjekte edin. Ayak parmağı sıkışmasına yanıt verilmediğini doğruladıktan sonra, hayvanı diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin ve hayvanın boynunu iyodopovidon ile dezenfekte edin.
Daha sonra, deride yaklaşık 2 santimetrelik bir kesi yapın ve boynu ortaya çıkarmak için tükürük bezlerini yerinden çıkarın. Trakea ve tiroid bezini ortaya çıkarmak için kayış kaslarını incelemek için diseksiyon forseps ve / veya makas kullanın ve 5 mikrolitre hacmindeki tümör hücrelerini krikoid kıkırdağın yanında bulunan sağ tiroid lobülüne enjekte etmek için 10 mikrolitrelik bir şırınga kullanın.
Tüm hücreler verildiğinde, tükürük bezlerini yeniden konumlandırın ve kesiyi kapatmak için ipek örgülü, kaplamalı, emilmeyen dikişler kullanın. Ardından, yara bölgesine iyodopovidon uygulayın ve fareyi tam iyileşme sağlanana kadar izlemeli termik bir battaniyeye yerleştirin.