3D sferoidlerin agaroz jel damlalarına gömülmesi: Aşağı akış analizi için sferoidleri korumak için bir teknik

Sferoidler, in vivo tümör mikro çevresini taklit eden ve tümör ilerlemesini incelemeye yardımcı olan üç boyutlu in vitro küresel hücresel agregatlardır. Bu sferoidleri gömerek korumak için, istenen bir tamponda sferoidler içeren steril bir tüp alarak başlayın.

Sferoidleri paraformaldehit ile tedavi edin. Paraformaldehit, hücresel proteinleri çapraz bağlayarak hücre yapısının stabilizasyonu ve korunması ile sonuçlanır. Sferoidleri santrifüjleyin ve paraformaldehit içeren süpernatanı çıkarın. Küresel peleti tamponda yeniden askıya alın.

Daha sonra, istenen konsantrasyonda erimiş agaroz jel çözeltisi hazırlayın. Mikroskop lamı üzerine bir agaroz jel damlası yapın. Agarozun katılaşmasını önlemek için sürgüyü bir ısıtma bloğu üzerinde tutun.

Geniş delikli bir ucu olan bir mikropipet kullanarak, sferoidleri tüpten toplayın. Mikroskop lamına dokunmadan sferoidleri agaroz jel damlasının ortasına dikkatlice pipetleyin. Daha sonra, ECM'nin katılaşmasına ve sferoidleri içinde tutmasına izin vermek için slaytı uygun bir sıcaklıkta inkübe edin.

Mikroskop lamından yarı katı damlayı yavaşça bir doku kasetine aktarın. Gömülü sferoidleri daha sonraki aşağı akış analizine kadar etanolde saklayın.

Ba