JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:22 dk. • April 30th, 2023
Kriyojenik öğütme veya kriyofrezeleme, hücrelerden arındırılmış doku örneklerinin son derece düşük sıcaklıklara soğutulmasına ve biyokimyasal bileşimlerini korurken ince bir toz haline getirilmesine izin veren bir tekniktir.
Başlamak için, liyofilize doku türevli hücrelerden arındırılmış hücre dışı matris veya ilgilenilen ECM'yi elde edin. Küçük parçalar elde etmek için kıyın.
Ardından, kıyılmış ECM parçalarını bir öğütme kavanozuna aktarın. Freze toplarını freze haznesine yerleştirin. Numuneyi -196 °C'de dondurmak için yüklü öğütme kavanozunu sıvı nitrojene batırın.
Soğutulmuş kavanozu bir kriyofreze sistemine yükleyin. Dondurulmuş numuneyi istenen süre boyunca uygun bir frekansta kriyofrezelemeye tabi tutun.
Kriyofrezeleme sırasında, freze kavanozu yatay konumda radyal olarak salınır. Sonuç olarak, öğütme bilyelerinin ataleti, donmuş numuneyi kavanozun yuvarlatılmış uçlarında yüksek enerji ile çarpmalarını ve toz haline getirmelerini kolaylaştırır.
Ek olarak, öğütme kavanozunun hareketi, öğütme bilyelerinin hareketi ile birleştiğinde, homojen parçacık boyutu dağılımına sahip ince bir toz elde etmek için numunenin yoğun bir şekilde karıştırılmasını teşvik eder.
Şimdi, kriyofrezelenmiş ECM tozunu bir cam şişeye aktarın. Neme maruz kalmayı önlemek için şişeyi sıkıca kapatın. Numuneyi daha fazla kullanılana kadar kurutun.
Hücreden arındırılmış dokuyu ince bir şekilde kıymak için keskin cerrahi makas kullanın. İşlenmiş dokuyu kriyodeğirmen yapmak için, bir laboratuvar bilyalı değirmen sistemi için 25 mililitrelik paslanmaz çelik freze haznesini kıyılmış liyofilize ECM ile doldurun ve iki adet 10 milimetre paslanmaz çelik freze bilyesi ekleyin.
Yüklü freze haznesini kapatın ve 3 dakika boyunca sıvı nitrojene tamamen batırın. Ardından, donmuş numuneyi 30 hertz'de 3 dakika öğütün. Sıvı nitrojene batırma işlemini ve ECM ince bir toz haline gelene kadar frezelemeyi tekrarlayın.