JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:31 dk. • April 30th, 2023
ECM'den türetilen köpükler, doku mikro ortamının hücresel olmayan bir bileşeni olan hücre dışı matris kullanılarak elde edilen oldukça gözenekli iskelelerdir.
ECM'den türetilmiş bir köpük üretmek için, bir tüp içinde ultra ince ECM tozunun homojen bir süspansiyonunu alarak başlayın. ECM'nin topaklanmasını önlemek için süspansiyonu sürekli çalkalama ile ılık bir sıcaklıkta inkübe edin.
Daha sonra, bir şırınga kullanarak sıvılaştırılmış ECM süspansiyonunu istenen kalıba aktarın. ECM'nin katılaşması için kalıbı gece boyunca soğutun. ECM, üç boyutlu bir ağ yapısı oluşturmak için katılaşır.
Son olarak, ECM içeren katı kalıbı bir liyofilizatör şişesine yerleştirin. Şişeyi bir dondurarak kurutma sistemine bağlayın. Liyofilizatörün içinde, numune ultra soğuk bir sıcaklığa ve düşük basınca tabi tutulur. Bu, ECM ağının interstisyel boşluklarında buz kristallerinin oluşumuna neden olur.
Zamanla, liyofilizatörün basıncı ve sıcaklığı kademeli olarak yükselir. Bu koşullar süblimasyonu kolaylaştırır - katının erimeye uğramak yerine doğrudan gaz formuna dönüştüğü bir süreç.
Gaz halindeki buharlar buharlaşarak ECM ağı içinde boş alanlar bırakır ve böylece gözenekli ECM'den türetilmiş bir yapı iskelesi oluşturur.
ECM süspansiyonunu 37 santigrat derecede inkübe edin ve süspansiyon ısınana kadar 120 rpm'de sürekli çalkalayın. Ardından, numune süspansiyonunu istenen konsantrasyona seyreltmek için 0.2 molar asetik asit kullanın. 3 mililitrelik şırınga ve 18G iğne ile istenen kalıbı ECM süspansiyonu ile doldurun.
Köpükler, kalıbın şekline bağlı olarak çeşitli geometrilerde üretilebilir. Kalıpları örtün ve eksi 20 veya eksi 80 santigrat derecede dondurun. Ardından kalıpları bir liyofilizatör şişesine yerleştirin. Şişeyi laboratuvar dondurarak kurutma sistemine bağlayın ve kalıpları 24 saat veya tamamen kuruyana kadar kurutun.