DAPI Boyama Kullanılarak Hücre Ölümü Taraması: Kanserli Hücre Hatlarında IR ile İndüklenen Klonojenik Hücre Ölümünün Hızlı Taraması İçin Bir Yöntem

X ışınları gibi iyonlaştırıcı radyasyonlara maruz kalmak DNA hasarına neden olabilir ve sonunda hücre ölümüne yol açabilir. İyonlaştırıcı radyasyonların hücre ölüm profilleri üzerindeki etkisini taramak için, bir lamel yüzeyine yerleştirilmiş yapışık kanser hücrelerini içeren bir kültür kabı alarak başlayın.

Kültür kabını istenen süre boyunca X-ışınları ile ışınlayın. Bu tedavi hücrelerin içinde DNA hasarına neden olur. Daha sonra, harcanan ortamı kültür kabından aspire edin ve uygun bir fiksatif ekleyin. Bu çözelti hücrelere nüfuz eder ve sonraki boyama adımları sırasında hücresel bileşenleri yerine kilitler.

Fiksatif çözeltiyi atın. X-ışını ile muamele edilmiş hücreleri içeren lameli kültür kabından çıkarın. Lameli çevirin ve hücreler DAPI ile doğrudan temas halinde olacak şekilde üzerinde bir damla DAPI lekesi taşıyan bir cam sürgünün yüzeyine yerleştirin.

DAPI molekülleri çekirdeğe girer ve DNA'nın AT açısından zengin bölgelerine bağlanır. Şimdi, hücreleri bir floresan mikroskobu altında görselleştirin. Çekirdekler mavi görünür ve farklı morfolojiler sergiler.

Yoğunlaştırılmış ve parçalanmış çekirdekleri gösteren hücreler, apoptozun, programlanmış hücre ölümünün göstergesidir.