JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:33 dk. • April 30th, 2023
Spesifik dokunun hücre dışı matrisinden türetilen hücreden arındırılmış iskeleler, doğal hücre dışı mikro çevrelerini taklit eder. Bu iskeleler yapısal bütünlüklerini ve biyokimyasal bileşimlerini korur ve doku mühendisliği için umut verici platformlar olarak hizmet eder.
Hücrelerden arındırılmış bir domuz özofagus iskelesi hazırlamak için, yeni eksize edilmiş bir domuz özofagusu ile başlayın. Yemek borusunu uzunlamasına ikiye bölün ve kalıntıları gidermek için uygun bir tamponla durulayın. Ardından, yemek borusunu en içteki katman olan mukozal yüzeyi yukarı bakacak şekilde sabitleyin.
Yemek borusunun bir ucunda mukozayı alttaki submukozadan ayırın. Mukozal yüzeyi alttaki submukozadan tamamen ayırmak için yemek borusunu lamina propria adı verilen mukozanın gevşek bağ dokusu boyunca uzunlamasına inceleyin.
Ayrıca, daha yüksek yoğunluklu submukozal bezler ve daha kalın bir lamina propria tabakası içeren mukozanın proksimal ve distal bölgelerini eksize edin. Mukozal dokuyu eşit büyüklükte parçalar halinde kesin.
Dokuyu antibiyotiklerle desteklenmiş hipertonik bir salin solüsyonu ile tedavi edin. Antibiyotikler bakteri üremesini önlemeye yardımcı olur. Yüksek çözünen konsantrasyonunda, su hücrelerden dışarı çıkar ve büzülmelerine neden olur. Bu adım ayrıca hücresel ölüme ve hücre dışı matristen ayrılmaya yardımcı olur.
Şimdi, gevşemiş epiteli alttaki dokudan nazikçe ayırın. Hücresel kalıntıları gidermek için dokuyu tamponla durulayın. Son olarak, dokuyu gliserol içinde inkübe edin, bu da bazal zarın bütünlüğünü korurken hücreleri dehidre ederek ve parçalayarak doku hücresizleştirmesini daha da kolaylaştırır.
Hücresizleştirilmiş domuz özofagus iskelelerini hazırlamak için, bir domuz yemek borusunu uzunlamasına kesmek için makas ve bir cımbız kullanarak başlayın. Daha sonra, yemek borusunu 100 mililitre steril PBS içeren 180 mililitrelik steril bir kapta 10 dakika boyunca hafifçe çalkalayarak yıkayın.
Doku durulanırken,% 70 etanol içeren bir mantar diseksiyon tahtası püskürtün. Mantar kuruduğunda, yemek borusunu mukozal tarafı yukarı bakacak şekilde tahtaya sabitleyin. Şimdi, yemek borusunun bir ucundaki mukozal yüzeyi kavramak için steril cımbız kullanın ve mukozayı alttaki submukozadan ayırmak için dokuyu tahtadan uzaklaştırın.
Daha sonra, steril bir neşter bıçağı kullanarak, yemek borusunu lamina propria boyunca uzunlamasına inceleyin ve diseksiyon ilerledikçe mukozanın kaldırılmasına izin vermek için pimleri çıkarın. Altta yatan submukozayı atın ve kalan mukozayı 5 santimetre karelik parçalar halinde kesmek için bir neşter kullanın. Parçaları, gösterildiği gibi hafif çalkalama ile 150 mililitre steril PBS'de yıkayın.
Beş dakika sonra, dokuyu 37 santigrat derecede antibiyotiklerle desteklenmiş 150 mililitre 1 molar sodyum klorür çözeltisi içeren 180 mililitrelik bir tencereye aktarın. 72 saat sonra, dokuyu 150 mililitre steril PBS'ye aktarın, bu noktada epitel alttaki dokudan gözle görülür şekilde ayrılmaya başlayacaktır.
Ayrılan epiteli çıkarmak için steril forseps ve bir neşter bıçağı kullanın ve kalan dokuyu hafif çalkalama ile beş dakikalık üç yıkama ile 150 mililitre steril PBS'lik taze bir tencereye yerleştirin. İskeleyi tamamen sterilize etmek için doku şimdi en az dört ay boyunca gliserolde saklanmalıdır.