Manyetik Boncuk Bazlı Eksozom Ekstraksiyonu: Biyoakışkanlardan Belirli Eksozomları İzole Etme Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:03 dk. • April 30th, 2023
Eksozomlar, hücreler tarafından biyosıvılara salgılanan hücre dışı veziküler yapılardır. Biyosıvılardan belirli eksozomları yakalamak için, bir tüpte streptavidin kaplı manyetik boncuklar alarak başlayın.
Bu tüpe, biyotinile edilmiş anti-insan antikorları ekleyin. Antikorlar üzerinde bulunan biyotin, manyetik boncuklarda bulunan streptavidin için yüksek bir afiniteye sahiptir. Bu, antikorların manyetik boncuklarla konjugasyonu ile sonuçlanır.
Daha sonra, antikor etiketli manyetik boncukları içeren tüpe protein açısından zengin bir bloke edici çözelti ekleyin. Bloke edici solüsyondaki proteinler, manyetik boncuklar üzerindeki serbest bölgelere bağlanır ve eksozom bağlanmasının özgüllüğünü arttırır.
Şimdi, tüpü eksozomlar açısından zengin bir örnek biyosıvı ile destekleyin. Tüpü çalkalama ile inkübe edin. Biyoakışkandaki eksozomlar, manyetik boncukların yüzeyine bağlı antikorlara bağlanmalarına yardımcı olan spesifik yüzey reseptörleri gösterir.
Ardından, tüpü manyetik bir alana yerleştirin. Manyetik alanın etkisi altında, eksozoma bağlı manyetik boncuklar tüpün yüzeyine yapışır. Ardından, bir mikropipet kullanarak, kalan biyosıvıyı tüpten aspire edin.
Son olarak, tüpü manyetik aland
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin