JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:32 dk. • April 30th, 2023
Hasta kaynaklı ürotelyal hücreli karsinom veya UCC fare modeli üretimi için, bağışıklığı baskılanmış bir fare, kanserin ilerlemesini ve metastazı incelemek için insan UCC hücreleri ile aşılanır.
Ksenogreftlemeye başlamak için, bağışıklığı baskılanmış anestezi uygulanmış bir dişi fare alın. Pelvik bölgesini ortaya çıkarmak için farenin alt sırtını tıraş edin. Şimdi, fareyi, açıkta kalan derisi, elektrik stimülasyonu sırasında devreyi tamamlamak için topraklama elektrodu görevi gören bir dağıtıcı ped ile temas edecek şekilde sırtüstü pozisyona getirin.
Ardından, bir kılavuz tele bağlı ince içi boş bir tüp olan bir anjiyokateter alın. Kateterin yüzeyini yağlayın ve mesanesine erişmek için farenin üretrasına yerleştirin. Mesane duvarını uyarmak için kılavuz tel üzerine aktif bir elektrot yerleştirin. Bu prosedür, mesane mukozasının koruyucu bir bariyeri olan mukopolisakkarit tabakasının yırtılmasına yardımcı olur ve daha sonra tümör hücrelerinin aşılanmasına yardımcı olur.
Şimdi, anjiyokateter kılavuz tel tertibatını üretradan nazikçe çıkarın. UCC hücre süspansiyonunu içeren bir şırıngaya bağlı ikinci bir anjiyokateter alın ve farenin üretrasına yerleştirin. UCC hücrelerini farenin mesanesine enjekte edin. Kanser hücreleri, sonunda diğer doku ve organlara yayılabilen bir tümör oluşturmak için mesane mukozası ile etkileşime girer.
Hayvanı UCC hücre enjeksiyonuna hazırlamak için, 6 ila 8 haftalık dişi NOD / SCID farenin alt sırtını tıraş etmek için tüy dökücü krem kullanın. UCC hücrelerini mesaneye uygulamak için önce 4 watt gücünde bir monopolar elektrokoter makinesi kurun. Fareyi uyuşturduktan sonra, burnu bir izofluran burun konisine gelecek şekilde sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve dağıtıcı bir elektrot üzerinde sıkıca topraklanmış olarak sırtını çıplak bırakın.
24 gauge anjiyokateteri kayganlaştırıcı jöle ile yağlayın ve ardından anjiyokateteri fare üretrasından nazikçe ama sıkıca yerleştirin. Kateter girişte bükülürse, stabiliteyi sağlamak için kılavuz teli kateterin yarısına kadar yerleştirin. Ardından, 0,64 milimetrelik sabit çekirdekli düz kılavuz teli anjiyokateterin ucundan 1 milimetre geçecek şekilde tamamen yerleştirin.
Monopolar pimi kılavuz tele 1 saniye tutun, bu da mesane mukozasının elektriksel tahrişine izin verir. 1 mililitrelik Luer-Lok şırıngaya taze bir steril anjiyokateter takın ve 200 mikrolitreye kadar UCC hücresi çizin. Kılavuz teli ve anjiyokateteri üretradan çıkarın ve ardından anjiyokateteri ona bağlı hücre şırıngası ile yerleştirin.
Hücrelerin 50 mikrolitresini fare mesanesine enjekte edin ve hücrelerin mesane duvarına yapışmasını sağlamak için anjiyokateteri çıkarmadan önce birkaç saniye bekleyin. Son olarak, fareyi izofluran burun konisinden ve topraklama pedinden çıkarın ve sıkıntı belirtileri için prosedürü takip eden 1 saat boyunca gözlemleyin.