JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:30 dk. • February 22nd, 2023
Hücreden arındırılmış tüm organ iskeleleri, sağlam bir vasküler ağa sahip üç boyutlu bir hücre dışı matristen oluşur. Bu iskeleler, spesifik doku bileşimini ve fonksiyonel bütünlüğü korur ve organ biyomühendisliğinde önemli bir rol oynar.
Hücresizleştirilmiş bir sıçan böbreği hazırlamak için, önce ana arteriyel ve venöz vaskülatürü - abdominal aort ve inferior vena kava ile birlikte yeni hasat edilmiş bir sıçan böbreği elde edin. Sonraki perfüzyon işlemi sırasında sıvı sızıntısını önlemek için üreter, minör arteriyel ve venöz çatallanmaları bağlayın.
Organ hidrasyonunu sağlamak için böbreği uygun bir tampona yerleştirin. Uygun büyüklükte kateterleri ana damar sistemlerine yerleştirin ve sabitleyin. Kateteri peristaltik bir pompaya bağlayın. Böbreği antikoagülan içeren bir tampon ile istenen süre boyunca uygun bir akış hızında ve basınçta perfüze edin.
Bu adım, venöz çıkış yoluyla kanın organdan verimli bir şekilde çıkarılmasına yardımcı olur. Hücresel zarlara nüfuz etmek için perfüzatı iyonik olmayan bir yüzey aktif maddeye değiştirin. Daha sonra, hücresel ve nükleer zarları etkili bir şekilde çözündürmek için organı anyonik bir yüzey aktif madde ile perfüze edin, bu da hücre lizizine ve hücre içi içeriğin salınmasına neden olur.
Serbest kalan hücresel bileşenler ve döküntüler böbrekten dışarı akar ve yavaş yavaş yarı saydam hale getirir. Hücreden arındırılmış böbrek, kalan yüzey aktif maddeyi ve organdan kalan kalıntıları gidermek için antibiyotikler ve antikoagülanlar içeren uygun bir tampon enjekte edin. Antibiyotikler, hücreden arındırılmış organ içinde bakteri üremesi olasılığını önler.
Sol böbreği abdominal aort ve inferior vena kava ile birlikte alın. Üreter, torasik aort, superior vena kava ve abdominal aortun dallarını bağlayın. Organı DPBS'de 10 santimetrelik bir Petri kabında nemli tutun. Abdominal aort ve inferior vena kava'yı 23 gauge kateter ile kanül edin.
Kalan kanı çıkarmak için, kanülü peristaltik bir pompa ile bağlayın ve organı 500 mililitre DPBS ve mililitre başına 16 birim heparin ile 90 dakika boyunca 5 rpm ve 37 santigrat derecede yıkayın. Böbreği hücrelerden arındırmak için, 3 saat boyunca% 1 Triton X-100 ile ve daha sonra 40 mililitre cıva sabit basıncında 6 saat% 0.75 SDS çözeltisi ile perfüze edin.
Artık SDS'yi çıkarmak için, numuneyi 18 saat boyunca damıtılmış suda %1 penisilin ile ve ardından steril DPBS ve 90 dakika boyunca mililitre heparin başına 16 birim ile perfüze edin.