Hücre Dışı DNA Boyama: FFPE Doku Kesitlerinde Hücre Dışı DNA'yı Tanımlamak İçin Bir Yöntem

Ölmekte olan bir hücre, hücre dışı DNA adı verilen hücrenin dışına bir DNA fraksiyonu salgılar. Hücre dışı DNA'yı boyamak için, bir cam slayt üzerinde formalinle sabitlenmiş parafine gömülü veya FFPE doku kesiti alarak başlayın. Cam sürgüyü istediğiniz süre boyunca ısıtın. Bu, dokunun slayt yüzeyine yapışmasını kolaylaştırır ve çevredeki parafini yumuşatır.

Doku etrafındaki parafin tabakasını tamamen çözmek için slaytı deparafinizasyon sıvısına batırın. Daha sonra, deparafinize edilmiş dokuyu yeniden sulandırmak için slaydı azalan etanol konsantrasyonlarına batırın. Rehidrasyonun ardından, slaytı kaynayan antijen alma çözeltisine batırın. Bu tedavi, fiksasyon işlemi sırasında değiştirilen epitopların maskesini çıkarır.

Slaytı birincil antikorlarla kaplayın ve hücre üzerinde bulunan belirli maskelenmemiş epitoplara bağlanmalarına izin verin. Ardından, birincil antikorlara bağlanan floresan etiketli ikincil antikorları ekleyin. Arka plan otofloresansını azaltmak için slaydı Sudan Black solüsyonuna batırın.

Son olarak, doku bölümünün üzerine DAPI ile takviye edilmiş bir damla montaj ortamı yerleştirin ve bir lamel ile kapatın. DAPI moleküllerinin DNA'yı lekelemesine izin vermek için i