İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden İnsan Böbrek Podositlerinin Türetilmesi: Olgun Böbrek Podositlerinin Kök Hücrelerden Yönlendirilmiş Farklılaşması İçin Bir Prosedür

Olgun hücreler, kök hücre benzeri farklılaşmamış ve proliferatif durumlarını yeniden kazanmak için yeniden programlanabilir. Bu yeniden programlanmış hücrelere indüklenmiş pluripotent kök hücreler veya IPSC'ler denir. Pluripotent hücreleri, atıkların böbreklerden süzülmesinde yer alan podositlere özel hücrelere ayırmak için, bir mezoderm indüksiyon ortamında insan IPSC'lerinin bir süspansiyonunu alarak başlayın.

Bu süspansiyonu bodrum matrisi kaplı bir kültür plakasına aktarın ve inkübe edin. Bodrum matrisi, IPSC'lerin tabana yapışmasını kolaylaştırır. Daha sonra, ortamda bulunan spesifik faktörler, IPSC'lerin podositler için öncü hücreler olan mezoderm hücrelerine farklılaşmasını indükler. Harcanan medyayı aspire edin.

Plakayı istenen hacimde bir ara mezoderm indüksiyon ortamı ile destekleyin ve uzun süre inkübe edin. Bu adım, mezodermal hücrelerin olgunlaşmamış podositlere farklılaşmasına yol açar. Yapışık hücreleri plakadan ayırmak için ara mezoderm indüksiyon ortamını bir tripsin çözeltisi ile değiştirin.

Sonraki, hücreleri peletlemek için santrifüjleyin. Tripsin çözeltisi ve matris parçaları içeren süpernatanı atın. Peleti bir podosit indüksiyon ortamında yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonunu yeni kaplanmış bir kültür plakasına aktarın. Ara hücrelerden birkaç ayak benzeri çıkıntının gelişmesine izin vermek için kuluçkaya yatırın, bu da olgun podositlerin oluşumuna neden olur.

Saydıktan sonra, hücreleri mililitre mezoderm indüksiyon orta konsantrasyonu başına 1 kez 10 ila beşinci hücreye yeniden süspanse edin ve hücre dışı matris çözeltisini bazal membran matrisi 2 kaplı plakalardan aspire edin. Plakaları ılık ortamla iki kez durulayın ve insan kaynaklı pluripotent kök hücre süspansiyonunu nazik pipetleme ile karıştırın.

Bazal membran matrisi 2 kaplı 12 oyuklu plakaların her bir oyuğuna 1 mililitre hücre ekleyin ve hücreleri daha eşit bir şekilde dağıtmak için plakaları hafifçe sallayın. Ardından, plakayı hücre kültürü inkübatörüne yerleştirin. Farklılaşmanın 2 ila 15. günlerinde, mezoderm indüksiyon ortamını kuyucuk başına 1 mililitre ara mezoderm indüksiyon ortamı ile değiştirin.

Ortamın sararması ile belirtildiği gibi önemli hücre büyümesi ve besin maddelerinin hızlı bir şekilde tükenmesi gözlenirse, ara mezoderm farklılaşma ortamının hacmi kuyu başına 1.3 mililitreye çıkarılabilir. Kültürün 16. gününde, ara mezoderm hücrelerini ılık ortamla durulayın ve hücreleri 37 santigrat derecede 3 dakika boyunca oyuk başına 500 mikrolitre% 0.05 tripsin-EDTA ile inkübe edin.

Hücreler ayrışmaya başladığında, hücreleri bir hücre kaldırıcı ile kazıyın ve hücreleri pipetleyerek nazikçe karıştırın. Oyuk başına yaklaşık 2 mililitre tripsin nötralize edici çözelti ile reaksiyonu durdurun ve hücreleri 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Hacmi orta ile 50 mililitreye getirin ve hücreleri santrifüjleme ile toplayın.

Pelet ve podosit indüksiyon ortamını, mililitre orta konsantrasyon başına 1 kez 10 ila beşinci hücrede yeniden süspanse edin ve hücreleri bazal membran matrisi 2 kaplı plakalara ekleyin. Ardından, hücrelerin daha eşit bir şekilde dağılmasına yardımcı olmak için plakayı hafifçe sallayın ve hücreleri 5 güne kadar inkübatöre yerleştirin.

• Induced Pluripotent Stem Cells (IPSCs) - Reprogrammed mature cells with a proliferative, undifferentiated state similar to stem cells.
• Podocytes - Specialized cells involved in the filtration of waste from kidneys.
• Mesoderm Cells - Precursor cells for podocytes that are derived from IPSCs.
• Mature Podocytes - Fully developed podocytes, characterized by several foot-like projections.
• Directed Differentiation - A process of driving the development of undifferentiated cells into a specific cell type.

• Introduce Induced Pluripotent Stem Cells (IPSCs) - Cells which can be reprogrammed to regain a stem cell-like state (e.g., pluripotent).
• Key Concepts - Summarization of the steps from IPSCs to mature podocytes (e.g., directed differentiation of IPSCs, kidney mesoderm).
• Underlying Mechanisms - This involves various elements, such as media induction, cell incubation, and resuspension (e.g., deriving).
• Connect to Experiment - Understanding of how this process is valuable in studying kidney functions (e.g., podocytes kidney, normal human kidney podocytes).

• What are Induced Pluripotent Stem Cells (IPSCs) and how are they reprogrammed?
• What are podocytes and how do they function in the kidney?
• What is the process of deriving podocytes from mesoderm cells?

• Practical Applications - Generation of podocytes could be used in testing pharmaceutical effects on kidneys (e.g., kidney podocytes).
• Industry Impact - The research may offer new treatments for kidney-related diseases (e.g., human podocytes).
• Societal Importance - A better understanding of the IPSCs may revolutionize regenerative medicine (e.g., pluripotent).
• Link to Scientific Advancements - The evolution of technology that could manipulate cell development (e.g., directed differentiation of ipsc).