Detrusor Düz Kas Hücresi İzolasyonu: İnsan İdrar Kesesi Örneklerinden DSM Hücreleri Elde Etmek İçin Enzimatik Bir Sindirim Prosedürü

İdrar kesesi duvarında bulunan detrusor düz kas veya DSM hücreleri, mesanenin birincil fonksiyonel birimini oluşturur. Bu hücreler mesanede idrar depolanmasını kolaylaştırmak için gevşer ve idrarı serbest bırakmak için kasılır.

DSM hücrelerini izole etmek için, hasat edilmiş bir insan idrar kesesi örneği alarak başlayın. Kan ve kalıntı izlerini gidermek için numuneyi yıkayın. Daha sonra, dokuyu mukozal yüzeyi yukarı bakacak şekilde sabitleyin. Altta yatan detrusor kas tabakasını ortaya çıkarmak için yağı, kan damarlarını ve mukozal tabakayı çıkarın. Ardından, mukozasız dokuyu küçük parçalar halinde kesin.

Doku parçalarına papain içeren bir sindirim kokteyli uygulayın ve inkübe edin. Proteolitik bir enzim olan papay, hücreleri bir arada tutan hücre dışı matriksteki proteinlerin sindirimini teşvik eder ve matriksteki hücrelerin gevşemesini başlatır. Şimdi, papain içeren süpernatanı çıkarın.

Doku parçalarına kollajenaz enzim süspansiyonu ekleyin ve fizyolojik sıcaklıkta inkübe edin. Kollajenaz, hücre dışı matrisi parçalar ve DSM hücrelerinin ayrışmasını kolaylaştırır. Fizyolojik sıcaklıkta inkübasyon, DSM hücre bütünlüğünün korunmasına yardımcı olur. Kollajenaz içeren süpernatanı atın