Amfoterisin-B Aracılı Delikli Yama-Klemp Analizi: Mesane Hücrelerinde İyonik Akımları İncelemek İçin Elektrofizyolojik Bir Teknik

Delikli yama kelepçesi tekniği, idrar kesesinin detrusor düz kas veya DSM hücreleri gibi hücreler üzerindeki iyon kanallarının aktivitesi ile ilişkili iyonik akımların gerçek zamanlı ölçümlerine izin verir.

Başlamak için, DSM hücre süspansiyonunu bir cam hazneye yükleyin ve hücre yapışmasını sağlamak için inkübe edin. Daha sonra, yapışan hücrelere tetraetilamonyum ve sezyum iyonları içeren hücre dışı bir çözelti ekleyin. Bu katyonlar, hücre zarındaki potasyum kanallarını bloke eder ve enterferans yapan potasyum akımlarını engeller.

Daha sonra, bir amplifikatöre bağlı bir kayıt elektrodu içeren ince içi boş bir cam tüp olan cilalı bir yama kelepçesi pipeti alın. Pipeti önden hücre içi bir solüsyonla doldurun ve aynı solüsyonla doldurun, ancak zar delici bir antibiyotik olan amfoterisin-B içerir.

Şimdi, pipet ucunu DSM hücreleri içeren hücre dışı çözeltiye daldırın. Potansiyeli ve akımı uygun seviyelere ayarladıktan sonra, pipet ucunu hücre zarına doğru ilerletin ve aynı anda elektrot direncini izleyin.

Direnç değerindeki hızlı bir artış, pipet ucunun hücre zarına ulaştığını gösterir. Şimdi, pipet ucu ile plazma zarı arasında giga-seal adı verilen sıkı bir sızdırmazlık oluşturmak içi