Glomerül İzolasyonu: Murin Böbrek'ten Sağlam Glomerül Elde Etme Tekniği

Omurgalı böbreklerinde, nefronlar, atıkların vücuttan filtrelenmesinde birincil rol oynayan yoğun bir kan damarı ağı olan çoklu glomerüllerden oluşur.

Glomerülleri izole etmek için, yeni kesilmiş bir fare böbreği alarak başlayın. Böbrek kapsülünü böbrekten ayırmak için forseps kullanın ve temiz böbreği yeni bir kültür kabına koyun. Şimdi, böbrek bozulmasını önlemek için tabağı buzun üzerine yerleştirin. Böbreği küçük parçalar halinde kıyın.

Daha sonra, kıyılmış böbrek parçalarını uygun bir tampon çözeltisinde tekrar süspanse edin. Doku süspansiyonunu büyük boyutlu bir ağ filtreden süzün ve akışı taze bir tabakta toplayın. Glomerüller böbrek parçalarından ayrılana kadar her seferinde ağ boyutunu kademeli olarak azaltırken bu adımı birkaç kez daha tekrarlayın.

Son olarak, böbrek parçaları süzüntüde kalırken daha küçük sıkışmış glomerülleri toplamak için filtreyi istenen kültür ortamıyla yıkayın. Glomerülleri ultra düşük bir bağlantı plakasına aktarın. Ters çevrilmiş bir ışık mikroskobu kullanarak plakayı görselleştirin.

Bir mikropipet yardımıyla, tek bir glomerulus yakalayın ve taze bir kuyuya aktarın. Kuyuyu kültür ortamı ile destekleyin ve daha fazla analiz için izole edilmiş glome