JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 2:42 dk • April 30th, 2023
Kanser sferoidleri, tümör hücrelerinin üç boyutlu hücresel agregatlarıdır. Bu sferoidler kollajen matrisine gömülebilir ve bu da sferoid blokların oluşumuna neden olur. Bir sferoid bloğu hızlı dondurmak için, bir histoloji kalıbının ortasına bir kollajen jel sferoid bloğu yerleştirerek başlayın.
Bloğu uygun bir tamponla durulayın ve kalıbı sabitleyici bir çözelti ile destekleyin. Bu çözeltinin sferoidlere nüfuz etmesine ve hücresel proteinleri çapraz bağlamasına izin vermek için inkübe edin. Bu adım, sonraki prosedür için küresel yapının korunmasına yardımcı olur. Ardından, sabitleyici çözeltiyi aspire edin.
Küresel jel bloğunu, ince bir gömme ortamı tabakası içeren yeni bir histoloji kalıbına yerleştirin. Küresel bloğu tamamen batırmak için daha fazla gömme ortamı ile kaplayın. Son olarak, kalıbı kısa bir süre için sıvı nitrojen banyosuna batırın.
Hızlı dondurma, sferoidler içinde daha büyük buz kristallerinin oluşumunu önler. Mekanik hasara neden olmadan sferoid bütünlüğünün korunmasına yardımcı olur. Gömme orta tabakası küresel bloğun etrafında katılaştığında, donmuş bloğu kalıptan çıkarın. Daha fazla histolojik analiz için donmuş sferoid bloğu düşük sıcaklıklarda saklayın.
İlk olarak, kollajen jeli ve sferoid bloğunu oda slaytından kaldırmak için küçük forseps kullanın. Ardından, kollajen jel bloğunu plastik bir histoloji kalıbına yerleştirin. Kollajen jel bloğunu 1X PBS ile kısa bir süre durulayın ve oda sıcaklığında 30 dakika boyunca PBS'de% 4 PFA ile sabitleyin. Bundan sonra, kollajen jel bloğunu 1.5 mililitre 1X PBS ile bir çalkalayıcı üzerinde 15 dakika yıkayın.
Yeni bir plastik histoloji kalıbının altına ince bir OCT bileşiği tabakası uygulayın. Ardından, kalıbın geri kalanını OCT bileşiği ile dikkatlice doldurmadan önce sabitlenmiş ve yıkanmış kollajen jel bloğunu OCT bileşiğinin üzerine yerleştirin. Kalıbı 1 saat boyunca 4 santigrat derecede tutun. Bundan sonra, kalıbı sıvı nitrojen üzerinde yüzen 100 milimetrelik bir Petri kabında hızlı dondurun ve numuneleri eksi 80 santigrat derecede saklayın.