DNA Plazmitlerinin Fare Mesanesinin Urothelium'una Verilmesi: Genetik Olarak Tasarlanmış Modeller Oluşturmak için DNA Plazmitlerini Murin Mesanesinin Ürotelyal Hücrelerine Verimli Bir Şekilde Vermek İçin Elektroporasyon Tabanlı Bir Prosedür

Başlamak için, sırtüstü pozisyonda anestezi uygulanmış bir dişi fare hazırlayın. Mesanesinin tamamen boş olduğundan emin olun. Üretral açıklıktan yağlanmış bir kateter yerleştirin. Yağlama, mesaneye giriş için düzgün üretral geçişe yardımcı olur.

Kateterizasyonun ardından, abdominal bir kesi yapın ve mesaneyi ortaya çıkarmak için iç kas sistemini inceleyin. Daha sonra, kateterin dış ucuna uygun bir boya ile karıştırılmış bir DNA plazmit süspansiyonu pipetleyin. Bu DNA plazmitleri, bir floresan raportör geni kodlar.

Katetere bir şırınga takın ve plazmid çözeltisini mesaneye vermek için itin. Enjekte edilen boya molekülleri mesaneyi renklendirir ve plazmit çözeltisinin başarılı bir şekilde uygulandığını doğrular. Kateter tertibatını çıkarın ve plazmit çözeltisinin dışarı akmasını önlemek için dış üretral deliği sıkın.

Şimdi, bir elektroporasyon jeneratörüne bağlı iki elektrot kullanarak mesaneyi sıkıştırın. Mesaneye istenen süre boyunca uygun voltajda elektrik darbeleri uygulayın. Mesanenin en iç astarı olan mesane ürotelyumunun uygulanan elektrik alanlarına maruz kalması, ürotelyal hücre zarında geçici gözeneklere neden olur.

Artan zar geçirgenliği, enjekte edilen DNA plazmitlerinin