JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:11 dk. • April 30th, 2023
Eksozomlar - fonksiyonel biyomoleküller taşıyan nano boyutlu, zara bağlı veziküller - çoğu hücre tipi tarafından aktif olarak salgılanır ve in vitro hücre kültürü süpernatanlarından izole edilebilir. Eksozomları izole etmek için, önce süpernatan veya şartlandırılmış ortamı ilgilenilen bir hücre kültüründen hasat edin. Şartlandırılmış ortam, eksozomlar, proteinler, hücresel kalıntılar ve veziküller içerecektir.
Hücresel kalıntıları peletlemek için ortamı santrifüjleyin. Eksozom içeren süpernatanı toplayın ve daha büyük vezikülleri çıkarmak için hücre süzgeçlerinden süzün. Filtrelenmiş ortamın belirli bir hacmini yeni bir tüpe aktarın. Daha sonra, süreksiz bir sakaroz gradyanı olan bir sakaroz yastığı hazırlamak için uygun konsantrasyonlarda sükroz ve döteryum oksit karıştırın.
Ortam içeren tüpe belirli bir hacimde sükroz yastık çözeltisi ekleyin; çözelti altta ayrı bir tabaka oluşturur. Şimdi, tüpü yüksek hızda santrifüjleyin. Sükroz yastığı, eksozom bütünlüğünü korurken eksozomların ortamdan sükroz çözeltisine göçünü kolaylaştırır. Yüksek yoğunluklu protein kirleticileri, sükroz çözeltisi ile ortam arasındaki arayüzü işgal eder.
Eksozom içeren sükroz tabakasının ana fraksiyonunu uy
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin