Murin Renal Hücre İzolasyonu: Renal Tübüler Epitel Hücrelerinin Primer Kültürünü İzole Etmek ve Oluşturmak İçin Bir Teknik

Renal tübüler epitel hücrelerini veya TEC'leri izole etmek için, bir Petri kabında yeni izole edilmiş bir fare böbreği alarak başlayın. Böbreği çevreleyen ince dış tabaka olan böbrek kapsülünü soyun ve medullayı veya böbreğin en iç kısmını çıkarın, tübül ve tübüler epitel hücrelerini içeren korteksi bırakın.

Kalan böbrek parçalarını küçük parçalar halinde doğrayın ve kollajenaz enzimi içeren ılık bir sindirim tamponunda inkübe edin. Kollajenaz, böbrek dokularını bir arada tutan kollajen proteinini parçalayarak renal tübülleri ve böbrek hücrelerini süspansiyona bırakır.

Sindirilmemiş böbrek dokularını çıkarmak için süspansiyonu süzün. Ardından, süzüntüye önceden soğutulmuş kültür ortamı ekleyin. Düşük sıcaklık kollajenazı nötralize eder ve daha fazla doku sindirimini durdurur. Diğer hücre tipleri ve safsızlıklar askıda kalırken daha yoğun tübüllerin ve tübüler hücrelerin çökmesine izin vermek için süzüntüyü düşük hızda santrifüjleyin.

Bu istenmeyen süpernatan fraksiyonu çıkarın ve peleti yeniden süspanse etmek için kültür ortamı ekleyin. Süspansiyonu kollajen kaplı bir kültür kabına tohumlayın ve inkübe edin. Serbest tübüler hücreler kollajene sıkıca bağlanırken, tübüller askıda kal