JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:36 dk. • April 30th, 2023
Plazmit DNA'yı doğrudan fare böbrek hücrelerine iletmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi yanal pozisyonda yerleştirerek başlayın. Fareyi sırt kürkünü yandan çıkararak hazırlayın. Sol tarafta, göğüs kafesinin altında uygun bir kesi yeri bulun.
Deride ve alttaki kas katmanlarında küçük bir yarık açın. Ardından, böbreği insizyon bölgesinden açığa çıkarmak için karın boşluğuna hafif bir baskı uygulayın. Renal pelvisi görselleştirmek için üst üste binen perinefrik yağ dokusunu kısmen çıkarın.
Şimdi, hidrodinamik bir dağıtım tamponunda plazmit DNA içeren bir şırınga alın. İğneyi doğrudan renal pelvise yerleştirin - böbrekteki üreterin üçgen, genişlemiş bir kısmı. Plazmit çözeltisini, DNA doğrudan böbrek parankimine (böbreğin kanı filtreleyen fonksiyonel kısmı) ulaşacak şekilde hızlı bir şekilde enjekte edin.
Renal pelvis boyunca büyük sıvı hacminin hızlı bir şekilde verilmesi, renal parankimal hücrelerin plazma zarında geçici gözenekler oluşturan yüksek bir basınç oluşturur. Bu, plazmitlerin hücrelere girişini kolaylaştırır. Sonunda, bu gözenekler kapanır ve plazmitleri hücrelerin içinde hapseder.
Son olarak, iğneyi geri çekin ve böbreği karın boşluğuna geri koyun. Kesi yerinde deri ve kas tabakalarını dikin.
Steril cerrahi eldivenler giyin ve insizyonun yanından başlayarak, hayvanı dairesel hareketlerle üç kez yeni bir klorheksidin / alkollü çubukla sürün. Şimdi, kesi bölgesini bulun. Cildi cımbızla sıkıştırın ve makas kullanarak cilt tabakasını göğüs kafesinin altındaki omurgadan yaklaşık 1 santimetre kesin. Kas tabakasının altında başka bir merkez kesim yapın. Böbreği bulun ve dokunmadan, parmaklarınızla karın üzerine sabit ve hafif bir baskı uygulayarak karın boşluğundan nazikçe açığa çıkarın.
Böbreği açığa çıkarmak bazen zordur. Dalağa zarar vermemek için karın ve omurgaya hafif baskı uygulayın. Böbrek dışındaki organlar dışarı çıkarsa, gerekirse kapalı forseps kullanarak nazikçe vücut boşluğuna geri koyun.
Ardından, küçük beyaz bir nokta olarak görülebilen renal pelvisi görselleştirmek için böbreği çevreleyen yağdan nazikçe ayırın. Renal pelvisi görselleştirdikten sonra, renal pelvisin görünümde kalması için böbreğin sağ tarafını aşağı doğru itmek için kapalı forseps kullanın. Daha sonra yüklü insülin şırıngasını sağ elinizle çalışma yüzeyine paralel tutarak kavrayın ve iğneyi dikkatlice renal pelvise yerleştirin.
İğne yerleştirildikten sonra, çözeltiyi 3 saniye içinde hızlı bir şekilde enjekte edin. Çözeltinin geri akışını önlemek için iğnenin yaklaşık 10 saniye yerinde kalmasına izin verin. Daha sonra iğneyi yavaş ve dikkatli bir şekilde çıkarın ve kapalı forseps kullanarak kesi bölgesini nazikçe gererek organı karın boşluğuna geri koyun. Şimdi, kas tabakasını 5-0 emilebilir dikişlerle dikin ve 2 ila 4 bağımsız düğüm yerleştirin. Benzer şekilde, cilt tabakasını 5-0 veya 6-0 emilmeyen naylon dikişlerle dikin ve 2 ila 4 bağımsız düğüm yerleştirin.