Zebra Balığı Böbreğinin Depigmentasyonu ve Prestainasyonu: Yetişkin Zebra Balığı Böbreğini Boyamaya Hazırlama Tekniği

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kanser Araştırmaları

0 görüntüleme • 3:36 dk • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yetişkin zebra balığı böbreği, balığın sırt vücut duvarına bitişik bulunan yarı saydam bir yapıdır. Böbrek, dağınık melanositlere karşılık gelen yüzeysel siyah noktaların varlığını sergiler - böbrek kök hücrelerini zararlı UV radyasyonlarından koruyan özel hücreler.

Böbreği depigmente etmek ve lekelenmeye hazırlamak için, ötenazi yapılmış yetişkin bir zebra balığı alarak başlayın. Bütün zebra balığını uygun bir fiksatif solüsyona batırın ve istenen süre boyunca kuluçkaya yatırın. Kuluçka, fiksatif solüsyonun balığın vücuduna nüfuz etmesine ve doku bileşenlerini yerine kilitlemesine izin verir.

Sonra, zebra balığını ventral olarak yerleştirin ve başını çıkarın. Baş bölgesinin altından başlayıp kuyruk yüzgecine kadar uzanan uzun bir ventral kesi yapın. Altta yatan böbreği ortaya çıkarmak için organları çıkarın. Forseps kullanarak, böbreği sırt duvarından ayırın ve bir cam şişeye yerleştirin.

Disseke edilen böbreği artan bir sükroz çözeltisi konsantrasyonu ile tedavi edin. Sükroz çözeltisi, böbreklerin küçülmesini önleyen izotonik bir ortam oluşturur. Daha sonra, melanosit pigmentasyonunu gidermek için böbreği bir ağartma solüsyonunda inkübe edin. Bu, daha sonraki boyama prosedürleri sırasında böbreğin daha iyi görselleştirilmesine yardımcı olur.

Son olarak, istenmeyen bölgeleri bloke etmek ve spesifik olmayan lekelenmeleri önlemek için ağartma solüsyonunu bir bloke edici solüsyonla değiştirin. Depigmente yetişkin zebra balığı böbreği artık sonraki boyama adımları için hazırdır.

Hazır olduğunda, böbreği sırt vücut duvarından dikkatlice ayırmak için ince forseps kullanın ve organı bir cam şişeye yerleştirin. Diseke edilen böbreği 3 ila 5 mililitre 1x PBS ile her biri% 0.05 Tween ile 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.

Daha sonra, PBS solüsyonunu çıkarın ve böbreği 3 mililitre% 5 sükroz solüsyonu ile 30 dakika boyunca durulayın. Bu sürenin sonunda, çözeltiyi 3 mililitre% 30 sükroz ile değiştirin ve gece boyunca 4 santigrat derecede saklayın.

Ertesi gün, solüsyonu çıkarın ve böbrek organında bulunan melanosit pigmentasyonunu gidermek için 3 ila 5 mililitre ağartma solüsyonu eklemeden önce böbreği iki kez yıkayın. Cam şişeyi bir döndürücüye yerleştirin ve pigmentasyon kaybolurken dikkatlice izleyin. Depigmentasyon tipik olarak yaklaşık 20 dakika sürer, ancak bazen 60 dakika kadar sürebilir.

Beyazlatma solüsyonu çok uzun süre bırakılırsa, parçalanma meydana gelebilir ve bu nedenle doku bütünlüğünü kontrol etmek için numunenin her 10 ila 15 dakikada bir izlenmesi önerilir. Pigmentasyon böbrekten çıkarıldığında, iki kez yıkayın ve% 4 PFA çözeltisi ile oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin.

Ardından,% 4'lük PFA solüsyonunu çıkarın ve böbreği üç kez yıkayın. Son yıkamadan sonra, 3 ila 5 mililitre bloke edici çözelti ekleyin ve böbreği oda sıcaklığında 2 saat inkübe edin. Engelleme tamamlandığında, doğrudan seçilen boyama protokolüne geçin.

07:40

Yetişkin Zebra balığı Böbrek diseksiyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:33

Zebra balığı bütün Dağı Floresan Situ hibridizasyon ve ayirt kombine bir protokol aracılığıyla Multiciliated hücrelerde görüntülenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:28

Basit ve etkili yönetim ve küçük balıklar böbrek enjeksiyon kullanarak dolaşım sistemi içinde Microparticles görselleştirme

İlgili videolar

0 Görüntüler

15:55

Akut Böbrek Sakatlık Eğitim Zebra balığı Larva İntravenöz Microinjections

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:04

Doğrudan Yetişkin Zebra balığı Böbrek Hücre Nakli

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:57

Böbrek Düz Montaj Hazırlığı: Yetişkin Zebra Balığı Böbreğinin Mikroskobik Analizi için Düz Bir Montajın İncelenmesi ve Hazırlanması Prosedürü

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:53

Yetişkin Zebra balığı Böbrek Nefron Kompozisyon ve Fonksiyon Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:25

Gentamisin Kaynaklı Sakatlık tarafından Yetişkin Zebra balığı Böbrek Rejenerasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:13

Bir Floresan Gümrükleme Testi kullanarak Zebra balığı Böbrek Fonksiyon Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:19

Interrenal steroidogenik Doku ve Zebra balığı Onun Vasküler Mikroçevre görselleştirme

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026