Genişleme Patolojisi: Klinik Doku Örneklerinin Yüksek Çözünürlüklü Optik Görüntülenmesi İçin Bir Yöntem

0 views • 4:14 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Genişletme patolojisi veya ExPath, geleneksel ışık mikroskobunun nano ölçekli yapıları bir polimer sistemi kullanarak genişleterek görüntülemesine olanak tanıyan biyolojik örnekler için bir örnek hazırlama tekniğidir.

İlk olarak, işlenmiş bir immün ile boyanmış doku örneği slaytı alın ve hem protein hem de polimer-reaktif gruplar içeren bir ankraj çözeltisi ile kaplayın. Ankraj reaktifinin protein-reaktif grubu, hücreler içindeki biyomoleküllerin aminlerine bağlanır.

Daha sonra, numunenin üzerine uygun bir jelleşme solüsyonu ekleyin ve doku içinde difüzyonuna izin vermek için inkübe edin. Ankraj reaktifinin polimer-reaktif grubu, jelleşme çözeltisi içindeki serbest monomerlere bağlanarak, biyomoleküllerin polimerize olurken polimere tutunmasına izin verir.

Numune polimerizasyonu tamamlandıktan sonra, slaytı bir proteinaz çözeltisi ile kaplayın. Proteinazlar, herhangi bir yapısal direnci ortadan kaldırmak için hücre iskeleti proteinlerini sindirir ve hücrelerin yırtılmadan genişlemesine izin verir. Enzimatik sindirimden sonra, jelleşmiş numune slayttan ayrılır ve süspansiyona geçer.

Şimdi, numuneyi mikroskop uyumlu bir kapta uygun bir yıkama tamponuna aktarın. Ardından, tamponu suyla değiştirin ve inkübe edin. Polimer, kütlesine göre muazzam miktarda su emer ve şişer.

Polimer genişledikçe, polimer ağına bağlı biyomoleküller, uzamsal yönelimlerini korurken birbirinden ayrılır. Bu, geleneksel bir ışık mikroskobu altında kolay görselleştirmelerine izin verir.

Ankraj çözeltisini el yazması talimatlarına göre hazırlayın. Slaytları 100 milimetrelik bir Petri kabına yerleştirin. Ankraj solüsyonunu doku üzerine pipetleyin ve oda sıcaklığında en az 3 saat inkübe edin. Ardından, el yazması talimatlarına göre jelleşme solüsyonu hazırlayın.

Doku bölümündeki fazla sabitleme solüsyonunu çıkarın ve slaytı tekrar Petri kabına yerleştirin. Numuneye taze soğuk jelleşme solüsyonu ekleyin ve karışımı 4 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin. Numunenin etrafındaki slayt üzerinde bir oda oluşturmak için, kapak camı parçalarını elmas bir bıçakla ince bir şekilde keserek ara parçalar oluşturun. Dokunun her iki yanındaki ara parçaları suyla sabitleyin ve doku üzerinde hava kabarcıkları oluşmamasını önleyerek sürgünün üzerine dikkatlice bir kapak cam kapağı yerleştirin.

Daha sonra numuneyi 37 santigrat derecede nemlendirilmiş bir ortamda 2 saat inkübe edin. Bir tıraş bıçağını lamel altından hafifçe kaydırarak ve jel yüzeyinden yavaşça kaldırarak jelleşme haznesinin kapağını çıkarın. Hacmi en aza indirmek için boş jeli dokunun etrafına kesin ve yönü izlemek için jeli asimetrik olarak kestiğinizden emin olun.

Proteinaz K 1:200'ü sindirim tamponunda seyreltin ve jeli tamamen batırmak için yeterli çözelti hazırladığınızdan emin olun. Daha sonra, numuneyi çözelti ile kapalı bir kapta 60 santigrat derecede 3 saat inkübe edin. Numune sindirim sırasında ayrılmazsa, nazikçe çıkarmak için bir tıraş bıçağı kullanın.

Numuneyi, istenen görüntüleme sistemiyle uyumlu ve tamamen genişlemiş jeli barındıracak kadar büyük bir kapta 1X PBS'ye aktarmak için yumuşak bir boya fırçası kullanın. Numuneyi PBS'de 10 dakika yıkayın ve istenirse 300 milimolar DAPI ile tekrar boyayın. Numuneyi yıkama başına 10 dakika boyunca 3 ila 5 kez fazla miktarda çift damıtılmış su ile yıkayarak numuneleri genişletin. Ardından, floresan görüntüleme gerçekleştirin.

17:08

Eşodaklı ve multiphoton Mikroskopi kullanarak beş Floresan Proteinleri ile işaretlenmiş Hematopoetik kök hücrelerin in vivo klonal Takip

Related Videos

0 Views

07:26

Roman Floresan Probları Plazma Membran Fosfatidilinositol 4,5-bisfosfatın tek molekül Süper çözünürlüklü görüntüleme

Related Videos

0 Views

06:18

Podosit Proteinleri Nephrin, Actin ve Podocin'in Genleşme Mikroskopisi ile Görüntülenmesi

Related Videos

0 Views

13:49

Yüksek çözünürlüklü Fiber-optik Mikroendoskopi In situ Hücresel Görüntüleme

Related Videos

0 Views

11:45

Üretim ve Farelerde arteriyel Lezyonlarının 3-Boyutlu kantitasyonu Optik Projeksiyon Tomografi ile

Related Videos

0 Views

10:07

Germinal Merkezleri derece Çözülmüş Intravital Çizgili-aydınlatma Mikroskopi

Related Videos

0 Views

06:18

Optik temizleme ve Immünolabeled böbrek dokusu görüntüleme

Related Videos

0 Views

09:11

Fiziksel ve İzotropik Genişleme Yoluyla İnsan Doku Bölümlerinin Nanoskobik Görüntülemesi

Related Videos

0 Views

06:47

Formalin-Sabit ve Parafin-Gömülü Doku Örneklerinin Kütle Spektrometrisi Görüntülemesini Kullanarak Tümör Mikroçevresinin Kavranmasının Genişletilmesi

Related Videos

0 Views

10:31

11 Katlı Genişleme Mikroskobu ile Üniversal Moleküler Retansiyon

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026