Genişleme Patolojisi: Klinik Doku Örneklerinin Yüksek Çözünürlüklü Optik Görüntülenmesi İçin Bir Yöntem

Genişletme patolojisi veya ExPath, geleneksel ışık mikroskobunun nano ölçekli yapıları bir polimer sistemi kullanarak genişleterek görüntülemesine olanak tanıyan biyolojik örnekler için bir örnek hazırlama tekniğidir.

İlk olarak, işlenmiş bir immün ile boyanmış doku örneği slaytı alın ve hem protein hem de polimer-reaktif gruplar içeren bir ankraj çözeltisi ile kaplayın. Ankraj reaktifinin protein-reaktif grubu, hücreler içindeki biyomoleküllerin aminlerine bağlanır.

Daha sonra, numunenin üzerine uygun bir jelleşme solüsyonu ekleyin ve doku içinde difüzyonuna izin vermek için inkübe edin. Ankraj reaktifinin polimer-reaktif grubu, jelleşme çözeltisi içindeki serbest monomerlere bağlanarak, biyomoleküllerin polimerize olurken polimere tutunmasına izin verir.

Numune polimerizasyonu tamamlandıktan sonra, slaytı bir proteinaz çözeltisi ile kaplayın. Proteinazlar, herhangi bir yapısal direnci ortadan kaldırmak için hücre iskeleti proteinlerini sindirir ve hücrelerin yırtılmadan genişlemesine izin verir. Enzimatik sindirimden sonra, jelleşmiş numune slayttan ayrılır ve süspansiyona geçer.

Şimdi, numuneyi mikroskop uyumlu bir kapta uygun bir yıkama tamponuna aktarın. Ardından, tamponu suyl