Cerrahi Sarnıç Magna Enjeksiyonu: Murin Modelinin Tümör Hücrelerini Doğrudan Merkezi Sinir Sistemine Uygulamak İçin Bir Yöntem

Murin beyni üç meningeal tabaka ile kaplıdır - en dıştaki dural membran, orta araknoid membran ve en içteki pia membranı.

Beynin arka bölgesinde, araknoid ve pia zarına, cisterna magna adı verilen beyin omurilik veya BOS dolu bir subaraknoid boşluk tarafından müdahale edilir.

Tümör hücrelerinin intrasternal enjeksiyonunu gerçekleştirmek için, anestezi uygulanmış bir fare modeli alarak başlayın. Kılları başın ventral yüzeyinden çıkararak fareyi hazırlayın.

Şimdi, fareyi yüzüstü pozisyona getirin ve kafasını stereotaksik bir çerçeveye takın. Farenin burnunu, omurgayı cisterna magna ile düzleştirmek için hafifçe aşağı doğru bakacak şekilde konumlandırın.

Makas kullanarak beynin arka ucunda, kulak hizasında küçük bir orta hat kesisi yapın.

Yüzeysel kas tabakasını dikkatlice bir kenara çekin. Cisterna magna, şeffaf dural membran ile kaplı ters çevrilmiş bir üçgen olarak görselleştirilebilir.

Ardından, dolaşımdaki tümör hücresi süspansiyonu içeren bir şırınga alın.

Çevreleyen kas sistemini geri çekerek, şırıngayı araknoid zarı delerek dura zarının altına yerleştirin. Bu adım, tümör hücrelerinin doğrudan cisterna magna'da bulunan BOS'a enjekte edilmesine izin verir.

Son olarak, yara klipsleri uygulayarak kesi bölgesini kapatın ve farenin iyileşmesine izin verin.

Fareye deri altına kilogram başına 1 miligram sürekli salınan buprenorfin enjekte ederek başlayın. Fareyi uyuşturduktan sonra ameliyat için hazırlayın. Kürkün kesi bölgesini kirletmesini önlemek için cerrahi bölgeyi yeterli sınır alanı ile klipsleyin.

Başın tüm yüzeyinin kürkünü tıraş edin ve cildi steril teknik kullanarak hazırlayın. Daha sonra, bölgeyi mikrop öldürücü cilt antiseptiği ile doyurun, sitenin merkezinden çevreye doğru çalışın ve kurumasını bekleyin.

Omurganın cisterna magna ile aynı seviyede tutulduğundan emin olmak için vücudu konumlandırın. Kuyruğa hafif bir çekiş uygularken, sabitlemek için kuyruk tabanına bant yerleştirin.

Cerrahi bölgeyi kontaminasyondan korumak için steril bir örtü veya steril yapışkan arkalı plastik örtü malzemesi uygulayın. Boyun tam ekstansiyonda iken, cerrahi makas uçlarını, kulak kepçesinin hemen arasından başlayarak oksipital kemik boyunca hafif bir basınçla aşağı doğru hareket ettirin.

Palpe edilen içbükeyliğin biraz üzerinde 3 ila 5 milimetrelik küçük bir orta hat kesisi yapın. 5 mikrolitre hücre süspansiyonunu 30G'lik bir Hamilton şırıngaya çekin. Cisterna magna'ya hafifçe bastırmak için 1 ila 2 milimetre uçlu künt uçlu forseps kullanın.

Uçları kapalı bir konuma getirin ve dura üzerine aşağı doğru baskı uygularken açın. Dural membran kolayca tanımlanana ve ilişkili kan damarları açıkta kalan alanda görünene kadar künt diseksiyonu tekrarlayın.

Forsepsleri tutarken, çevredeki kas sistemini geri çekmek için açın. Eğimi görselleştirmek için duranın altına 30 G'lik karotsuz bir iğne yerleştirin ve iğnenin yalnızca eğimin hemen ötesine sokulduğundan emin olun.

Bir şırınga pistonunu yavaşça yerleştirin ve hücreleri dura'nın hemen altına yerleştirin. Enjeksiyon bölgesinde sızıntı fark edilirse, pamuk uçlu bir aplikatör ile hafif bir baskı uygulayın. Bir yara klipsi veya bir mikro damla cilt yapıştırıcısı uygulayarak cildi kapatın.

Ameliyattan sonra ilk hafta fareleri günlük olarak izleyin. Bir fare ağrı veya sıkıntı içinde görünüyorsa, veteriner konsültasyonu ve direktifine bağlı olarak 5 güne kadar her 12 ila 24 saatte bir, kilogram karprofen başına 10 miligram deri altı enjeksiyonu ile tedavi edin.