Luciferase etiketli Glioma Kök Hücre Modeli: Luciferase etiketli Glioma Kök Hücrelerini In Vitro Terapötik Çalışmalar için Hazırlamak için Lentivirus aracılı bir yöntem

Glioma kök hücreleri veya GSC'ler, beyindeki glial hücrelerin kanseri olan gliomun bir alt popülasyonudur.

Bu GSC'leri lusiferaz gibi biyolüminesan enzimlerle etiketlemek, ilaç taraması için yüksek verimli görüntüleme tahlillerinin oluşturulmasına yardımcı olur.

Lusiferaz etiketli GSC'leri hazırlamak için, uygun bir büyüme ortamında bir GSC kültürü ile başlayın.

Bir hücre peleti elde etmek için kültürü santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın.

Pelete uygun sindirim enzimleri ekleyin. Bu enzimler, hücre kümelerini ayırır ve tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için herhangi bir bağ dokusu izini bozar.

Şimdi, tek hücreli süspansiyonu santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. Peleti taze bir ortamda yeniden süspanse edin.

Daha sonra, istenen hücre konsantrasyonunu bir kültür plakasına tohumlayın.

Kültürü inkübe edin ve hücrelerin kültür plakasına yapışmasına izin verin.

Daha sonra, lusiferaz ile zenginleştirilmiş yeşil floresan proteini veya EGFP için virüs içeren bir gen yapısının istenen titresini ekleyin ve inkübe edin.

Virüs, GSC'lerin yüzey reseptörleri ile etkileşime girerek lusiferaz-EGFP içeren viral RNA'nın salınımını tetikler. Hücresel enzimler, RNA'nın çift sarmallı DNA'ya ters