JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 6:23 dk. • April 30th, 2023
Mikroglia, fagositoz adı verilen bir işlemle patojenleri, hücre kalıntılarını ve kanserli sinir hücrelerini veya nöroblastomu uzaklaştırmaya yardımcı olan beyin makrofajlarıdır.
İn vitro fagositozu taklit etmek için, paraformaldehit içinde sabitlenmiş bir nöroblastom hücresi kültürü ile başlayın.
Kimyasal bir fiksatif olan paraformaldehit, fosfatidilserin gibi zar fosfolipidlerinin rastgele dağılımına neden olur ve aynı anda hücre yapısını stabilize ederken hücre zarının dış yüzeyine translokasyonlarına neden olur.
Şimdi, nöroblastom hücre kültürüne pH'a duyarlı amin reaktif bir floresan boya ekleyin ve inkübe edin.
Boya molekülleri, nöroblastom hücre yüzeyindeki fosfatidilserin amin gruplarına bağlanır.
Tüpü santrifüjleyin ve bağlanmamış boya molekülleri içeren süpernatanı çıkarın. Hücre peletini uygun bir tampon ve santrifüj ile durulayın.
Süpernatanı çıkarın ve peleti kültür ortamında yeniden süspanse edin.
Daha sonra, önceden boyanmış makrofajları bir kültür plakasında tohumlayın. Lekeli makrofajlar mavi bir çekirdek ile kırmızı görünecektir.
Bu kültüre lekeli nöroblastom hücreleri ekleyin ve inkübe edin.
Makrofaj-fagositik reseptörler, nöroblastom hücreleri üzerinde açığa çıka
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin