JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:55 dk. • April 30th, 2023
Çekirdekleri izole etmek için, bir Petri kabında taze bir donmuş glioma örneği - beynin glial hücrelerinden kaynaklanan bir tümör - alarak başlayın.
Doku bozulmasını önlemek için petri kabını buzun üzerine yerleştirin.
Daha sonra, doku örneğini küçük parçalar halinde kıyın.
Kıyılmış doku parçalarına önceden soğutulmuş bir lizis tamponu ekleyin. Karışımı bir Dounce homojenizatöre aktarın. Havaneli kullanarak, hücreleri parçalamak ve lizizi başlatmak için dokuyu homojenize edin.
Şimdi, homojenatı yeni bir lizis tamponu içeren bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.
Geniş delikli bir pipet ucu kullanarak homojenatı mekanik olarak parçalayın. Bu adım, sitoplazmik organellerin hücrelerden salınmasını kolaylaştırır.
Daha sonra, uygun boyutta bir hücre süzgeci kullanarak, doku kalıntılarını ve diğer kirleticileri gidermek için homojenatı yeni bir tüpe süzün
.Filtrasyondan sonra, çeşitli hücre organelleri içeren filtratı alın.
Diğer hücre organelleri süpernatantta kalırken alttaki daha yoğun çekirdekleri topaklamak için süzüntüyü düşük bir hızda santrifüjleyin.
Organel içeren süpernatanı atın. Ham çekirdek açısından zengin peleti, daha fazla aşağı akış sıralaması için uygun bir depolama tamponu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin