Çekirdeklerin Gradyan Santrifüj Tabanlı Saflaştırılması: Yoğunluk Gradyanlı Santrifüjleme Kullanılarak Bozulmamış Çekirdeklerin Ultra Saf Fraksiyonunu Elde Etme Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:05 dk. • April 30th, 2023
Sağlam çekirdekleri izole etmek ve saflaştırmak için, bir tüpte ham bir çekirdek fraksiyonu alarak başlayın. Fraksiyon, kırık çekirdek parçaları ve döküntülerle birlikte sağlam çekirdekler içerir.
Bu fraksiyonu, en düşük konsantrasyonda bir süspansiyon oluşturacak şekilde uygun bir yoğunluk gradyan ortamı ile karıştırın.
Şimdi, çok adımlı bir süreksiz yoğunluk gradyanı oluşturmak için önceden hazırlanmış ham çekirdek fraksiyonunun altında aynı gradyan ortamının artan yoğunluklarının katman çözümleri. Bu adım, ham çekirdek fraksiyonunun gradyanın tepesinde bir bant oluşturmasına izin verir.
Ardından, tüpü düşük bir hızda santrifüjleyin.
Şekil ve kütle farklılıklarına bağlı olarak, bozulmamış çekirdekler, enkaz ve nükleer parçalara kıyasla farklı şekilde göç eder. Bu, sağlam çekirdeklerin ayrı bir bant oluşturmasına neden olur.
Santrifüjlemeden sonra, yoğunluk gradyan çözeltilerinin arayüzünde bozulmamış çekirdeklerden oluşan farklı bandı bulun.
Bir pipet kullanarak, saf çekirdek bandına erişimi kolaylaştırmak için gradyanın üst katmanlarını aspire edin. Çekirdek içeren bandı yeni bir tüpe toplayın.
Bu çekirdekleri ışık mikroskobu altında görselleştirin. Sağlam çekirdekler, onları çe
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin