JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 2:37 dk • April 30th, 2023
Fare beyin örneğini hızlı dondurma yoluyla dondurarak saklamak için, oldukça iletken bir sıvı olan izopentan çözeltisi ile doldurulmuş bir beher alarak başlayın ve sıvı nitrojen içeren bir kavanoza daldırın.
Çözelti viskoz hale gelene kadar izopentanı dondurun.
Bu arada, sakaroz çözeltisine önceden eklenmiş bir fare beyin örneği alın. Bu tedavi sonraki aşamalarda beyin dokusu deformasyonunu önler.
Beyin örneğini sakaroz çözeltisinden çıkarın ve sükroz izlerini gidermek için kurulayın.
Ardından, beyni istenen yönde bir gömme ortamı tabakası içeren derin bir kriyokalıba yerleştirin.
Tüm organın kaplandığından emin olmak için beyni kriyo kalıbın içine daha fazla gömme ortamı ile kaplayın.
Ardından, gömülü beyni içeren kriyokalıbı önceden soğutulmuş izopentan banyosuna daldırın. Beyin dokusunun ultra düşük bir sıcaklığa hızlı bir şekilde soğutulması, beyin mimarisinin herhangi bir bozulma olmadan korunmasını sağlar.
Şimdi, beyin örneğinin, gömme ortamı katılaşana ve beynin etrafında jelatinimsi bir tabaka oluşturacak şekilde katılaşana kadar donmasına izin verin ve onu yerinde tutun.
Dondurulduktan sonra, kriyokalıbı izopentan banyosundan çıkarın ve dondurularak saklanmış fare beynini bir folyo tabakaya sarın.
Daha fazla histolojik analiz için numuneyi eksi seksen santigrat derecede saklayın.
Kriyoprezervasyona hazırlanmak için bir kavanozu soğuk izopentan/2-metilbütan ile doldurun ve kavanozu sıvı nitrojenle dolu bir kaba koyun. Çözücü soğurken, beyni bir parça filtre kağıdına kurulayın ve beyni etiketli bir kriyokalıba yerleştirin.
Kriyo kalıbın merkezine dikkatlice yaklaşık 5 mililitre optimum sıcaklıkta kesme ortamı ekleyin ve beyni istenen yönde kalıba yerleştirin. Temiz forseps kullanarak, kriyokalıbı 30 ila 40 saniye boyunca soğutulmuş izopentan/2-metilbütan içine hızlı bir şekilde yerleştirin.
Kesme ortamı katılaştıktan sonra, kriyokalıbı kuru buza aktarın ve eksi 80 santigrat derece saklama için kriyokalıbı ve donmuş beyin dokusunu alüminyum folyoya sarın.
Bu makale, hızlı dondurma (snap freezing) teknikleri aracılığıyla fare beyin örneklerinin kriyoprezervasyon sürecini detaylandırmaktadır. Bu yöntem, sonraki histolojik analizler için beyin mimarisinin korunmasını sağlar.
Fare beyin dokusunun şok dondurma yoluyla kriyoprezervasyonu, doğal doku mimarisini koruyarak yüksek doğrulukta histolojik analize olanak tanır. Bu teknik, güvenilir morfolojik sonuçlar sağlayarak nörobilim ilaç keşfinde hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma süreçlerini destekler. Beyin dokusunu içeren preklinik çalışmalarda, tekrarlanabilir örnek hazırlama konusundaki kritik bir ihtiyaca cevap verir.
Bu yöntem, erken hedef doğrulamasından, histolojik bütünlüğün devam/tamamlanma kararlarını etkilediği preklinik araştırmalara kadar uzanan keşif sürekliliğine uygundur.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026