JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 2:37 dk • April 30th, 2023
Bir fare beyninin kriyoseksiyonlarını veya ince donmuş doku bölümlerini elde etmek için, önce uygun bir gömme ortamına gömülü donmuş bir fare beyni bloğu alın.
Donmuş bloğu bir kriyostat odasına aktarın ve sonraki kesit alma prosedürü için bloğun sıcaklığının kriyostatın ayarlanan sıcaklığı ile dengelenmesine izin verin.
Ardından, donmuş doku bloğunu kriyostat numune diskinin tabanına monte etmek için gömme ortamı kullanın.
Numune diskini kriyostatın numune kafasına yerleştirin.
Ek olarak, kriyostatın bıçak tutucusuna bir bıçak sabitleyin.
Harici el çarkını kullanarak, doku bloğunu bıçakla hizalamak için numune kafasının konumunu ayarlayın.
Doku bloğu ve bıçak doğru bir şekilde yönlendirildikten sonra, doku bloğunun fazla gömme ortamı içeren istenmeyen bölgesini keserek kesiti başlatmak için el çarkını hareket ettirin.
Donmuş doku bloğu sabit bıçağa doğru ilerlerken istenilen kalınlıkta dilimler halinde kesilir.
Dilimlenmiş donmuş doku bölümlerini dikkatlice pozitif yüklü cam slaytlara aktarın. Yüklü cam kızaklar, donmuş doku bölümlerini elektrostatik olarak çekerek slayt yüzeyine yapışmalarını kolaylaştırır.
Son olarak, daha fazla analize kadar bölümleri düşük sıcaklıklarda saklayın.
Donmuş beyin tümörü dokusu kesitlerini elde etmek için önce bir kriyostatın sıcaklığını eksi 20 ila eksi 24 santigrat derece arasında ayarlayın ve numune bloğunu 30 ila 60 dakika boyunca kriyostat odasına yerleştirin.
Numune dengelenirken, hazneyi ve bıçak tutucuyu %100 etanol ile temizleyin ve kesit fırçalarına RNase temizleme solüsyonu püskürtün. Numune hazır olduğunda, kalıbı çıkarın ve donmuş doku bloğunu kriyostat numune diskine takmak için yeni kesme ortamı kullanın.
Bloğu disk tutucuya yerleştirin ve bloğu bıçak ağzıyla hizalayın. Doku parçalarını kesme yüzeyine dikkatlice düzleştirmek ve açmak için RNaz içermeyen fırçalardan birini kullanarak beynin 10 mikrometrelik bölümlerini elde edin.
Beyin dokusu bölümlerini slaytlara monte etmek için, etiketli RNaz içermeyen bir PEN cam sürgünün pozitif yüklü tarafını bölüme düzgün bir şekilde bastırın ve slaytı haznenin içindeki bir saklama kutusuna yerleştirin. Tüm slaytlar toplandığında, saklama kutusunu eksi 80 santigrat dereceye yerleştirin.
Bu makale, fare beyin dokusundan kriyokesitler elde etme prosedürünü açıklamaktadır. Dondurulmuş beyin örneklerinin ileri analizler için hazırlanması ve kesilmesi için gerekli adımları detaylandırmaktadır.
Dondurulmuş doku kesitleri alma işlemi, fare beyin dokusunun mimarisinin ve moleküler içeriğinin sonraki keşif uygulamaları için yüksek doğrulukla korunmasını sağlar. Bu prosedür, doku bütünlüğünü ve RNA kalitesini koruyarak hedef doğrulamayı ve biyobelirteç keşfini destekler; bu durum preklinik risk azaltma süreci için kritiktir. Nöro-onkoloji ve MSS ilaç keşif hatlarındakile mekansal moleküler analizler için standartlaştırılmış, tekrarlanabilir bir temel sunar.
Bu yöntem, erken hedef hipotez testinden öncü bileşik tanımlamaya ve preklinik doğrulamaya kadar olan keşif sürecine entegre olarak nöro-onkolojide uzamsal moleküler karakterizasyonu desteklemektedir.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026