JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:41 dk. • April 30th, 2023
Heterojen bir fare beyin tümörü dokusundaki spesifik hücre popülasyonlarını daha sonraki izolasyonları için ayırt etmek için, ilgilenilen dondurularak saklanmış beyin tümörü dokusu bölümünü taşıyan bir cam slayt alarak başlayın.
Dokuyu azalan etanol konsantrasyonlarında sırayla inkübe edin. Etanol, dokuya nüfuz eden gömme ortamını çözer ve nükleik asit bütünlüğünü korurken dokuyu sabitler.
Ek olarak, etanol dokuyu yeniden sulandırır ve sonraki adımlarda eşit lekelenmeyi sağlar.
Şimdi, dokuyu Cresil menekşe ile tedavi edin. Kresil menekşe - bazik bir boya - nükleik asitler gibi asidik hücresel bileşenleri lekeler.
Daha sonra, dokuyu Eosin Y ile karşı boyayın Eozin Y - asidik bir boya - sitoplazmik proteinler gibi temel hücresel bileşenleri boyar.
Bu diferansiyel boyama adımı, sitoplazma ve diğer hücresel yapılar arasında ayrım yapmaya yardımcı olarak ilgilenilen hücrelerin tanımlanmasını sağlar.
Boyama sonrası, dokuyu kurutmak ve aşırı doku bozulmasını önlemek için dokuyu artan etanol konsantrasyonlarına daldırın.
Sonra, dokuyu ksilen ile yıkayın. Ksilen, etanolü doku bölümünden uzaklaştırır ve uzaklaştırır.
Son olarak, doku morfolojisini korumak için doku bölümüne uygun bir montaj solüsyonu ekleyin.
İşlenmiş doku bölümü, belirli hücrelerin dokudan hassas bir şekilde izole edilmesini sağlayan bir işlem olan lazer mikrodiseksiyon için kullanılmaya hazırdır.
Slaytları 30 saniyelik sıralı azalan etanol daldırmalarına daldırın, ardından kristal viyole çözeltisini 20 saniye ve 5 saniye boyunca %0.5 eozin Y çözeltisine daldırın.
Eozin Y inkübasyonunun sonunda, slaytları kurutmak için filtre kağıdı kullanın ve slaytları sıralı artan etanol daldırmalarında kurutun. 60 saniyelik etanol daldırmasından sonra, slaytları bir ksilen kabında 3 dakika durulayın.
Daha sonra, numuneleri RNaz içermeyen su ile hazırlanan montaj ortamına monte etmeden önce slaytları RNaz içermeyen yüzeyde oda sıcaklığında 10 saniye kurutun. 10 ila 20 saniye sonra, slaytları mikroskop mikrodiseksiyon platformuna aktarın.