JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:37 dk. • April 30th, 2023
Mikroglial hücreler, daha büyük apoptotik cisimler ve daha küçük mikro boyutlu veziküller dahil olmak üzere hücre dışı veziküller veya EV'ler şeklinde immün mediyatörleri in vitro büyüme ortamına salar.
EV'leri izole etmek için, mikroglia şartlandırılmış ortam alarak başlayın. Bu kültür ortamı, salınan EV'lerle birlikte mikroglial hücreler içerir. Hücreleri peletlemek için ortamı santrifüjleyin.
EV'leri, kalıntıları ve protein agregalarını içeren süpernatanı yeni bir tüpte toplayın. Hücresel kalıntıları ve büyük apoptotik cisimleri çıkarmak için tekrar santrifüjleyin.
Süpernatanı bir ultrasantrifüj tüpüne aktarın. Yüksek hızda santrifüjleyin.
Kullanılmış ortam içeren süpernatanı atın ve EV ve protein agrega peletini istenen tamponda yeniden süspanse edin.
Aynı zamanda, tabanında uygun bir filtre bulunan bir boyut dışlama kromatografi sütunu alın.
Sütunu, tanımlanmış gözenek boyutuna sahip gözenekli bir elek oluşturan küresel jel boncuklardan oluşan bir jel filtrasyon matrisi ile sıkıca paketleyin.
EV ve protein agrega süspansiyonunu sabit fazın üzerine yükleyin.
Süspansiyon kolondan geçerken, daha büyük boyutlu EV'ler, jel boncuklar arasındaki parçacıklar arası boşluklardan geçerek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin