Hücre Dışı Veziküllerle İlişkili Proteinlerin SDS-PAGE Tabanlı Ekstraksiyonu: EV'lerden Proteinleri Ekstrakte Etme ve Bunları Jel İçi Sindirime Hazırlama Prosedürü

Başlamak için, sağlam hücre dışı veziküller veya EV'ler içeren bir tüp alın.

EV'leri istenen lizis tamponu hacminde askıya alın ve numuneyi sonikleştirin. Bu işlem, EV zarını parçalar ve genetik materyali keserek proteinleri tampona bırakır.

Hücre kalıntılarını ve kesilmiş genetik materyali peletlemek için santrifüjleyin. Çeşitli proteinler içeren süpernatanı toplayın.

Protein ekstraktına bir yükleme boyası ekleyin ve bir SDS-PAGE jeli üzerinde çalıştırın.

Boya moleküllerinin proteinleri bağlamasına izin vermek için jeli bir boyama solüsyonuna batırın. İstenen proteini içeren lekeli bandı bulun ve eksize edin.

Sonraki adımlarda proteinlerin enzimlere erişilebilirliğini artırmak için renkli bandı küçük parçalar halinde kesin. Bu parçaları bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.

Leke boyasını çıkaran leke giderici bir solüsyon ekleyin. Harcanan leke giderme solüsyonunu çıkarın.

Bir azaltma çözümü ekleyin. İndirgeyici ajanın proteindeki disülfür bağlarını parçalamasına izin vermek için inkübe edin ve serbest sülfhidril gruplarını açığa çıkarın.

İndirgenmiş proteinleri alkilleyici bir çözelti ile tedavi edin. Alkil grupları, proteini katlanmamış halde tutarak serbest sülfhidril gruplarına b