JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 3:07 dk • April 30th, 2023
Optik görüntüleme pencereleri aracılığıyla intravital görüntüleme, canlı bir hayvanda doğal mikro ortamdaki davranışlarını incelemek için tek tek hücrelerin yüksek çözünürlüklü izlenmesini kolaylaştırır.
Başlamak için, beyni kanser hücreleri ile önceden enjekte edilmiş ve implante edilmiş bir kafatası penceresi metal bir halkanın içine sığmış anestezi uygulanmış bir fareyi ele alalım. Kanser hücreleri nükleer floresan proteinleri ifade eder.
Fareyi, yüzü yukarı bakacak şekilde bir görüntüleme kutusuna yerleştirin. Görüntüleme kutusundaki manyetik tutucu, implante edilen kafatası penceresinin sabitlenmesine yardımcı olur.
Şimdi, beyindeki kanser hücrelerinin davranışını analiz etmek için görüntüleme kutusunu ters çevrilmiş bir mikroskobun çevre kontrollü görüntüleme odasının içine aktarın.
Çoklu foton modunda, lazeri uygun bir dalga boyuna ayarlayın. Kanser hücrelerinden gelen floresanı tespit etmek için tümör bölgesine odaklanın.
Farklı optik düzlemlerde kanser hücrelerinin birden fazla intravital görüntüsünü elde etmek için her konum için bir z-yığını tanımlayın.
Bu adım, hücre çözünürlüğünü etkilemeden tümör mikro ortamındaki kanser hücrelerinin önemli bir bölümünün yakalanmasını sağlar.
Daha sonra, uzun bir süre boyunca tümörün farklı pozisyonlarından görüntüler elde edin.
Kanser hücrelerinin farklı optik düzlemlerde izlediği yol, uygun yazılım kullanarak bireysel tümör hücresi göçünün belirlenmesine yardımcı olur.
Uygun deneysel zaman noktasında, fareyi yüzü yukarı bakacak şekilde bir görüntüleme kutusuna yerleştirin ve 25x su hedefini en düşük z konumuna ayarlayın. Objektife büyük bir damla su ekleyin ve görüntüleme kutusunu mikroskobun 37 santigrat derece karanlık iklim odasına aktarın.
Objektifi, su damlası lamel üzerine değene kadar kraniyal görüntüleme penceresi lamel üzerine getirin ve epifloresan modunu kullanarak, hücreleri odaklamak için tümörü göz merceğinden gözlemleyin.
Lazeri doğru dalga boyuna ayarlayın ve canlı modu seçin. Görüntüleme için birkaç ilgi alanı seçtikten sonra, koordinatlarını yazılıma kaydedin. Tümör hücresi çözünürlüğünden ödün vermeden maksimum tümör hücresi hacmini elde etmek için her pozisyon için bir z-yığını tanımlayın ve görüntüler arasındaki adım boyutu 3 mikrometreye ayarlayın.
Ardından, 2 saat boyunca her 20 dakikada bir farklı pozisyonlarda tümör hacminin görüntülerini elde edin ve her görüntü alımından önce hedefe su ekleyin. Son görüntü elde edildikten sonra, fareyi tam iyileşme sağlanana kadar izlemeli bir ısıtma yastığına aktarın.