DNA Sentezi Testi: Radyoaktif Tritiatlı Timidin İnfüzyonu Kullanılarak Çoğalan Hücrelerde DNA Sentezini Değerlendirme Tekniği

Yapışık hücreler içeren çok kuyulu bir plaka alarak başlayın.

Bu hücreleri, timidinin radyoaktif bir versiyonu olan tritiatlı timidin içeren bir ortamla tedavi edin ve inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, aktif olarak çoğalan hücreler radyoaktif timidin içerir. Bu timidin, adenozinin karşısına çıkar ve çoğalan hücrelerde radyoaktif işaretli DNA üretir.

Harcanan ortamı kuyulardan çıkarın. Hücreleri parçalamak için bir lizis tamponu ekleyin ve DNA'yı süspansiyona bırakın.

Biçerdöverin toplama tüplerini mikroplakanın kuyularının üzerine yerleştirerek hücre hasat makinesi tertibatını hazırlayın.

Kuyulardan askıya alınmış DNA'nın aspirasyonunu sağlamak için emme basıncı uygulayın. Bu DNA, filtre kağıdı üzerinde birikerek belirli noktalar oluşturur.

DNA lekeleri olan filtre kağıdı parçalarını kesin. Bu çarşafları ayrı ayrı parıldama şişelerine aktarın.

Filtre kağıdını bir parıldama kokteyli ile kaplayın. Şişeyi bir sıvı parıldama sayacına yerleştirin.

Tezgahın içinde, etiketli DNA radyoaktif bozunma yoluyla enerji yayar. Bu enerji, parıldama kokteylinin bileşenleri tarafından emilir. Sonunda, kokteyl bileşenleri darbeleri aktarmaya başlar ve bu da sensör tarafından emilir.

Tespit edilen ra