Hücre Dışı Vezikül Ekstraksiyonu: Diferansiyel Santrifüjleme Kullanarak Tüm Doku Örneklerinden Hücre Dışı Vezikülleri İzole Etme Tekniği

Tüm dokularda, hücre dışı veziküller veya EV'ler hücreler tarafından interstisyel sıvıya salınır. Bunlar arasında apoptotik cisimler, mikro-parçacıklar ve eksozomlar bulunur. EV'ler, hücreden hücreye iletişimin sürdürülmesinde önemli bir rol oynamaktadır.

EV'leri çıkarmak için, tam bir doku örneği alarak başlayın.

Dokuyu uygun bir ayrışma tamponu ile tedavi edin. Ayrışma tamponunun bileşenleri, dokuda bulunan hücre dışı matrisi parçalar ve sonunda hücreleri gevşetir.

Süspansiyonu bir homojenizatöre aktarın ve dokuyu mekanik olarak daha fazla parçalayarak onu ayrıştırın ve hücreleri serbest bırakın.

Daha sonra, EV'ler süpernatantta kalırken hücreleri ve doku parçalarını peletlemek için homojenatı düşük hızda santrifüjleyin.

Süpernatanı yeni bir tüpe alın. Daha büyük boyutlu apoptotik cisimlerin çoğunu peletlemek için yüksek hızda santrifüjleyin ve daha küçük boyutlu EV'leri süpernatantta bırakın.

EV içeren süpernatanı bir şırıngaya toplayın. Kalan apoptotik cisimleri çıkarmak ve küçük boyutlu EV popülasyonunu toplamak için bileşenleri filtreleyin.

Peletteki EV'leri elde etmek için süzüntüyü santrifüjleyin. Kalan tamponu atın ve EV peletini bir sakaroz çözeltisi içinde yeniden süspan