Hücre Dışı Veziküllerin Alt Popülasyonlarının Saflaştırılması: Yoğunluk Gradyanlı Ultrasantrifüjleme Kullanarak Hücre Dışı Veziküllerin Alt Popülasyonlarını Saflaştırma Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:27 dk. • April 30th, 2023
Hücre dışı veziküller veya EV'ler, beyin tümörü hücreleri de dahil olmak üzere çeşitli hücreler tarafından salgılanan nano boyutlu, heterojen, zara bağlı veziküllerdir. Küçük EV'ler, endozomal kaynaklı ve zar ağızlı EV'lerden oluşan bir alt popülasyondur.
Küçük EV'leri saflaştırmak için, homojen bir çözelti sağlayan ve EV'lerin yapısal bütünlüğünü koruyan sakaroz takviyeli bir tampon içinde süspanse edilmiş önceden ekstrakte edilmiş EV'leri alarak başlayın.
Bu çözeltiye, daha sonra, istenen yoğunluğu elde etmek için uygun bir hacimde iyodiksanol - inert ve toksik olmayan bir yoğunluk gradyan ortamı - ekleyin.
İodiksanol, daha sonra uzaklaştırılmak üzere kirletici proteinleri çözündürür.
Daha sonra, süreksiz bir yoğunluk gradyanı oluşturmak için art arda azalan yoğunluklara sahip iyodiksanol çözeltileri katmanları ekleyin.
Tüpü yüksek hızda santrifüjleyin.
Yüzdürme hızlarına bağlı olarak, daha yoğun EV'ler eşit derecede yoğun bir gradyan ortam katmanına göç ederken, daha az yoğun EV'ler daha hafif bir katmana daha fazla göç eder ve en yoğun kirleticiler tüpün dibinde bir pelet oluşturur.
Şimdi, gradyan katmanlarının küçük fraksiyonlarını uygun bir tampon içeren taze tüplere aktarın.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin