JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 6:41 dk. • April 30th, 2023
Astrosit in vitro kültür, en bol bulunan beyin hücreleri olan astrositlerin biyolojik rolünü araştırmaya yardımcı olur.
Diseksiyon mikroskobu altına yerleştirilmiş bir yenidoğan fare beyni ile başlayın.
Koku ampullerini ve beyinciği çıkarın.
Korteksi ayırmak için iki yarım küre arasında orta hat kesisi yapın.
Astrosit kültüründe fibroblastlardan ve meningeal hücrelerden kontaminasyonu önlemek için meninksleri çıkarın.
Korteks yarım kürelerini buz gibi soğuk bir ortama aktarın ve küçük parçalar halinde kıyın.
Kortikal parçaları tripsin içeren bir tüpte toplayın. Bir proteaz enzimi olan tripsin, hücre yapışma proteinlerini sindirerek hücre ayrışmasını kolaylaştırır.
Sindirilmiş dokuyu peletlemek için santrifüjleyin.
Süpernatanı çıkarın ve pelete bir astrosit ortamı ekleyin. Astrositler, mikroglia ve oligodendrosit öncü hücreleri veya OPC'lerden oluşan karışık bir hücre popülasyonunu serbest bırakmak için kuvvetlice pipetleyin.
Bu hücre süspansiyonunu poli-lizin kaplı bir doku kültürü şişesine tohumlayın ve inkübe edin.
Negatif yüklü hücreler, pozitif yüklü poli-lizine bağlanır ve birleşik bir tabaka oluşturmak için tüm yüzey üzerinde büyür.
Gevşek bağlı mikroglia ve OPC'leri ayırmak
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin