İmmün Boyama Birleştirilmiş Hücre Ayırma ile Mikroglia İzolasyonu: Floresan Aktif Hücre Sıralaması Kullanarak Zebra Balığı Beyin Hücrelerinden Mikroglia'yı İzole Etmek İçin Bir İmmün Boyama Yöntemi

Patolojik koşullar altında, aktive edilmiş mikroglia - özel beyin makrofajları - patojenleri ve hücre kalıntılarını ortadan kaldırmaya yardımcı olur. Bu mikroglialar, onları diğer makrofajlardan ayıran benzersiz reseptörleri eksprese eder.

Mikroglia'yı izole etmek için, farklı hücre tiplerinde spesifik floresan molekülleri ifade eden transgenik zebra balığından türetilen bir beyin hücre kültürü ile başlayın.

Kültür, kırmızı floresan ifade eden nöronların, yeşil floresan ifade eden makrofajların ve floresan olmayan mikrogliaların bir karışımını içerir.

Şimdi, bir bloke edici reaktif ekleyin ve kültürü aralıklı ajitasyon ile inkübe edin. Bloke edici reaktif, hücreler üzerindeki spesifik olmayan bölgelere bağlanır ve arka plan sinyalini azaltır.

Ardından, birincil antikorları ekleyin ve inkübe edin. Bu antikorlar, mikroglia yüzeyinde eksprese edilen spesifik reseptörlere bağlanır.

Kültürü santrifüjleyin ve bağlanmamış antikorlar içeren süpernatanı çıkarın. Hücre peletini taze bir ortamda yeniden süspanse edin.

Daha sonra, floresan boya konjuge ikincil antikorları ekleyin ve inkübe edin. Bu antikorlar birincil antikorlara bağlanır ve mikroglia-antikor kompleksine kırmızı bir renk verir