Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinden (PBMNC'ler) İndüklenmiş Nöral Kök Hücrelerin (iNSC'ler) Üretilmesi: PBMNC'leri iNSC'lere Yeniden Programlamak için Sendai Virüsü Tabanlı Bir Prosedür
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:05 dk. • July 8th, 2025
Somatik hücreleri indüklenmiş nöral kök hücrelere veya iNSC'lere yeniden programlamak için - yüksek kendini yenileme ve farklılaşma kabiliyetine sahip kök hücreler, eritroblastları genişletmek için periferik kan mononükleer hücrelerini serumsuz bir ortamda kültürleyerek başlayın.
Daha sonra, eritroplast süspansiyonunu bir kültür plakasına pipetleyin. Hücreleri rekombinant Sendai virüsü veya SeV ile tedavi edin. Bu virüsler yeniden programlama transkripsiyon faktörlerini kodlar. Hücreleri çökeltmek ve inkübe etmek için santrifüjleyin.
Konak hücre zarına SeV füzyonunu takiben, virüs genomu transkripsiyona ve ardından sitoplazmada translasyona uğrar. Transkripsiyon faktörlerinin ektopik ekspresyonu, genleri konakçı genomuna entegre etmeden hücre yeniden programlama sürecini tetikler.
Şimdi, virüsleri uzaklaştırmak için kültürü santrifüjleyin. Dönüştürülen hücreleri uygun bir ortamda yeniden süspanse edin, ardından kaplama yapın. Ayrıca, hücresel kalıntıları gidermek için santrifüjleyin. iNSC ortamındaki hücreleri yeniden askıya alın.
Daha sonra, hücreleri protein kaplı bir plakaya tohumlayın. Hücreler plakadaki protein kaplamasına yapışır. Yapışan hücreleri alternatif günlerde iNSC or
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin