Dolaşımdaki Hücresiz DNA'nın (cfDNA) İzolasyonu: Kanser Hastalarının Kan Plazmasından cfDNA'yı Çıkarmak için Silika Bazlı Bir Membran Prosedürü

Dolaşımdaki hücresiz DNA'lar veya cfDNA'lar, esas olarak apoptoz geçiren kanser hücreleri tarafından salınan kısa DNA parçalarıdır. cfDNA'lar umut verici kanser biyobelirteçleridir ve plazma gibi vücut sıvılarından izole edilebilirler.

CfDNA'yı izole etmek için önce bir kanser hastasından plazma örneği alın. Daha sonra, plazmayı proteinaz K, kaotropik tuzlar ve taşıyıcı RNA içeren bir lizis tamponu ile muamele edin. Kaotropik tuzlar proteinleri denatüre eder ve proteinlerden bağlı cfDNA'ları serbest bırakır. Proteinaz K, nükleazları inaktive eder, böylece cfDNA bozulmasını en aza indirir.

Daha sonra, istenen bağlama tamponunu numuneye ekleyin. Vakum aparatı üzerine katı faz silika matrisi içeren bir döndürme sütunu monte edin. Örneği sütuna yükleyin. Numuneyi silika membrandan geçirmek için vakum uygulayın.

Taşıyıcı RNA, tüp duvarlarına spesifik olmayan bir şekilde bağlanır. Tampondaki tuzların varlığı ile birlikte bu spesifik olmayan bağlanma, cfDNA'nın silika zarına bağlanmasını kolaylaştırarak cfDNA'ların geri kazanımını arttırır. Proteinler ve diğer kirleticiler zar üzerinde kalmaz.

Şimdi, döndürme sütununu bir toplama tüpüne yerleştirin. Kalan lizatı çıkarmak için santrifüjley