Glioma Hücrelerinin Floresan Etiketlemesi: Derin Doku Görüntüleme için Floresan Protein İfade Eden Glioma Hücreleri Elde Etmek İçin Lentiviral Vektör Tabanlı Bir Transfeksiyon Yöntemi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kanser Araştırmaları

0 görüntüleme • 3:39 dk • July 8th, 2025

İn vivo beyin kanseri görüntülemesi, tümör gelişimini gözlemlemek için floresan etiketli kanser hücrelerinin fare beynine enjekte edilmesini içerir. Floresan etiketleme için, glioma hücrelerini lentivirüs parçacıkları ile inkübe edin. Lentiviral vektör, kızılötesi floresan proteini, iRFP genini taşır.

Virüs, glioma hücre yüzeyine bağlanır ve RNA'yı hücreye bırakır. Hücresel enzimler, viral RNA'yı, hücresel genoma entegre olan ve iRFP ekspresyonuna izin veren çift sarmallı DNA'ya dönüştürür. iRFP'nin uyarılma ve emisyon maksimumları, dokuların minimum emilim ve saçılmaya sahip olduğu yakın kızılötesi bir bölgede yer alır. Bu, doğru derin doku görüntülemesine izin verir.

Ardından, harcanan ortamı çıkarın ve tripsin ekleyin. Bir proteaz enzimi olan tripsin, yapışma proteinlerini sindirerek hücreleri şişe yüzeyinden ayırır. Tek tek hücreleri ayırmak için tekrar tekrar pipetleyin. Hücre süspansiyonunu bir tüpe toplayın ve santrifüjleyin. Şimdi, peleti yeniden süspanse etmek için uygun bir tampon ekleyin.

Hücre süspansiyonunu akış sitometri tüplerine dağıtın ve hücreleri bir floresan boya olan DAPI ile boyayın. DAPI, ölü hücrelerin çekirdeğini parlak maviye boyar ve onları canlı hücrelerden ayırır. Floresanla aktive edilen bir hücre sıralayıcı veya FACS kullanarak, canlı iRFP pozitif hücreleri diğer hücre popülasyonlarından floresanlarına göre sıralayın. İzole edilen hücreler, tümör görüntüleme için farelere enjeksiyon için kullanılabilir.

Bir hücre kültürü inkübatöründe 24 saatlik bir inkübasyon için 10 santimetrelik bir tabağa 5 mililitre ortamda altıncı glioblastoma hücrelerine 1 kez 10 tohumlama yaparak başlayın. Ertesi sabah, hücreleri, 5'lik bir enfeksiyon çokluğunda uygun bir floresan proteini ifade eden lentivirüs ile transdüksiyon yapın ve hücreleri inkübatöre geri koyun.

24 saat sonra, süpernatanı 5 mililitre taze ortamla değiştirin ve kültürü 48 saat daha inkübe edin. İnkübasyonun sonunda, ortamı 37 santigrat derecede 10 ila 15 dakika boyunca 3 ila 5 mililitre tripsin ile değiştirin, ardından ayrılan hücreleri tamamen ayırmak için dikkatli pipetleme yapın.

Hücreleri santrifüjleme ile toplayın ve peleti 500 mikrolitre ayırma çözeltisinde yeniden süspanse edin. Hücreleri uygun sayıda FACS tüpüne bölün ve ölü hücre dışlaması için hücreleri DAPI ile kostarin. Daha sonra, tüpleri akış sitometresine yükleyin ve canlı hücreleri floresan yapı ifadelerine göre taze sıralama çözeltisi içeren 15 mililitrelik konik bir tüpe sıralayın.

Santrifüjlemeden sonra, yapı pozitif / DAPI-negatif hücreleri 5 mililitre kültür ortamında yeniden süspanse edin ve 48 ila 72 saat boyunca 37 santigrat derecede kültürleri için 10 santimetrelik yeni bir tabağa tohumlayın. Kuluçka süresinin sonunda, sonraki in vivo deneyler için tohumlama için hücreleri birden fazla tabağa bölün.

09:04

Floresan SapC-DOPS Nanovesicles kullanma Beyin Tümörleri ve Artrit Vivo Optik Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:04

Kemirgen tümör modelleri ilerlemesinde tümör izlemek için Imaging radyonüklid Floresans muhabir gen

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:17

Invaziv cerrahi biyopsiye yanıt olarak beyin tümörü hücre davranışının boyuna Intravital görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:17

Luciferase etiketli Glioma Kök Hücre Modeli: Luciferase etiketli Glioma Kök Hücrelerini In Vitro Terapötik Çalışmalar için Hazırlamak için Lentivirus aracılı bir yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:09

Floresan Moleküler Tomografi: Fare Modelinde Floresan Protein Etiketli Glioblastoma Ksenogreftlerinin İn Vivo Görüntülenmesi İçin Bir Görüntüleme Tekniği

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:02

Glioblastoma hücrelerinin 3 boyutlu kültürü için hyaluronik asit bazlı bir hidrojel

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:50

Bir glioblastoma kök hücre farklılaşma raportör hattı oluşturmak için bir Lentiviral transkripsiyonel raportör sistemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:07

Glioblastoma Dokusunda Tümör Hücresi Migrasyonunun Hızlandırılmış Taramalı Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Görüntülenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:17

Glioblastoma'nın için bir Immünkompetan Hayvan Modeli Biyoparlaklık Görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:52

Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026