Floresan Peptit Zimografi: Zymogram Jellerinde Florojenik Substratlar Kullanılarak Proteaz Aktivitesini Tespit Etmek İçin Modifiye Edilmiş Bir Teknik

Zimografi, hidrolitik enzimleri ve aktivitelerini tespit etmek için poliakrilamid jel ile kopolimerize edilmiş bir protein substratı içeren elektroforetik bir tekniktir. Başlamak için, numuneleri gliserol, sodyum dodesil sülfat veya SDS ve bromofenol mavisi içeren bir zimografi tamponunda çözün.

Gliserol, numune tamponunu jelin çevresindeki çalışan tampondan daha yoğun hale getirerek jel ceplerine kolay yükleme yapılmasını sağlar. Anyonik bir deterjan olan SDS, numunedeki enzimleri denatüre eder ve bunları negatif bir yükle kaplar. Bir izleme boyası olan bromofenol mavisi, jeldeki numune ilerlemesinin izlenmesine yardımcı olur.

Proteaz aktivitesini tespit etmek için numuneleri florojenik substratlarla gömülü poliakrilamid jel içine yükleyin. Şimdi elektrotları bağlayın ve elektroforeze başlayın. Üretilen elektrik alanı, SDS'ye bağlı tüm enzimlerin jel boyunca pozitif yüklü elektrota doğru göç etmesine neden olur.

Elektroforezin tamamlanmasının ardından, jeli çıkarın ve enzim renatürasyonuna izin vermek için SDS'nin yerini alan iyonik olmayan deterjan içeren bir renatüre edici tamponda yıkayın. Daha sonra, jeli, jeldeki enzimleri aktive eden iki değerlikli katyonlar içeren gelişmekt