JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 4:40 dk • July 8th, 2025
Kan-beyin bariyeri veya BBB, sıkı bağlantılarla birbirine bağlanmış, yakından düzenlenmiş endotel hücrelerinden oluşur. Bu, moleküllerin beyne hareketini kısıtlayan kompakt bir mühür oluşturur. BBB'ye nüfuz etmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi yüzüstü pozisyonda stereotaktik bir üniteye sabitleyerek hazırlayın.
Daha sonra, kuyruk damarına bir kateter yerleştirin ve kanın pıhtılaşmasını önlemek için pıhtılaşma önleyici bir solüsyonla yıkayın. Mikro kabarcıkların bir süspansiyonunu alın - bir lipit tabakası içine alınmış mikro gaz kürecikleri. Mikro kabarcıkları yanal kuyruk damarına enjekte edin. Bu mikro kabarcıklar kan dolaşımına girer ve sonunda beyne ulaşır.
Daha sonra, beynin yerini belirleyin ve dalgaların daha iyi iletilmesi için kafadaki ilgili noktaya ultrason jeli uygulayın. Farenin kafasında belirlenen alana bir ultrason dönüştürücü yerleştirin. Güçlü ve hedefli ultrason dalgaları uygulamak için dönüştürücüyü kullanın.
Ultrason dalgalarından gelen akustik basınç nedeniyle, mikro kabarcıklar birkaç kez hızla genişler ve büzülür. Bu salınımlar sonopermeasyona neden olur - endotelyal sıkı bağlantıların bozulması - BBB'de lokalize açıklıklar oluşturur. Bu açıklıklar, mikro kabarcıkların beyne iletilmesini kolaylaştırır.
Son olarak, boya içeren çözeltiyi intravasküler olarak enjekte edin. Boya molekülleri, BBB'deki geçici açıklıklar yoluyla damarlardan ekstravaze olur. Fare beyninde boya bulunması, başarılı bir sonoporasyona işaret eder.
BBB açılması için mikro kabarcıkların uygulanması için, 26 ila 30 gauge kuyruk damar kateteri yerleştirin ve damarı küçük bir hacimde heparin çözeltisi ile yıkayın. Ayrılmayı önlemek için kateteri doku bandı ile sabitleyin. Kateterizasyon başarılı olursa, kanın pıhtılaşmasını önlemek için kateteri heparin solüsyonu ile doldurun.
Hipotermiyi önlemek için hayvanı sıcaklık ayarlı stereotaktik platforma yerleştirin. Bir ısırma çubuğu ve kulak çubukları kullanarak hayvanın kafasını sabitleyin ve kuyruğu ve kateteri platforma bantlayın. Farenin gövdesini bir kayışla sabitleyin.
Stereotaktik platformu monte edilmiş fare ile görüntüleme modalitesine yerleştirin ve hayvanın görüntülerini çekin. Hayvanın platforma doğru şekilde yerleştirilip yerleştirilmediğini belirleyin. Dönüştürücünün odak noktasına göre görüntü işleme boru hattı ile birlikte çok modaliteli referans işaretleyicileri kullanarak hayvanın konumunu işaretleyin. Elde edilen X-ışını görüntüsünün üzerine bir beyin taslağı yerleştirerek veya tümörün merkezini belirlemek için BLI görüntülerini kullanarak hedef alanı belirleyin.
Dönüştürücüyü yerleştirmeden önce, ultrason jelinin solunumu engellemesini önlemek için hayvanın burun deliklerini ve ağzını bantla koruyun. Düzgün ses iletimi için farenin kafasının üzerine ultrason jeli uygulayın. Oksipital kemiğin hemen yakınına yerleştirilen iğne hidrofonu ile mikro kabarcık kavitasyonunu kaydedin.
Kalibrasyon değerlerine dayanarak, dönüştürücüyü hayvanın üzerinde doğru konuma yönlendirin. İlgilenilen beyin bölgesini hedeflemek için bağlı tüm cihazlara önceden yapılandırılmış ayarları uygulayın. Dönüştürücü doğru konuma yerleştirildikten sonra, mikro kabarcıkları üretici tarafından açıklandığı gibi çözün ve etkinleştirin.
Mikro kabarcık enjeksiyonundan önce, kuyruk damarı erişimini doğrulamak için kuyruk damar kateterini salinle yıkayın. İnsonication yörüngesini başlatın ve aynı anda mikro kabarcıkları enjekte edin. Aynı zamanda, iğne hidrofonu mikro kabarcık kavitasyonunu gerçek zamanlı olarak algılayacak ve doğrulayacaktır. İstenirse, sonoporasyondan sonra intravasküler bir kontrast madde veya ilaç uygulayın. Hayvanı önceden belirlenmiş bir zaman noktasına kadar izleyin.