JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 5:11 dk • July 8th, 2025
Perinöral invazyon, kanser hücrelerinin orijin bölgesinden uzağa metastaz yaparak sinirler içindeki perinöral boşluğu istila ettiği nadir bir metastatik fenomendir. Sinir mikroçevresi kanserin büyümesi ve çoğalması için uygun bir ortam sağlar.
Perinöral invazyonu in vivo simüle etmek için, yüzüstü pozisyonda anestezi uygulanmış bir fare hazırlayın. Uyluk kemiği - uyluk kemiğinin altında küçük, paralel bir kesi yapın. Vücuttaki en büyük ve en kolay erişilebilir sinir olan altta yatan siyatik siniri ortaya çıkarmak için uyluk kaslarını ayırın.
Siyatik sinir alt omurgadan kaynaklanır ve pelvik kaslardan her bacağa kadar uzanır. Alt ekstremitelerin koordineli hareketi için sinyalleri iletir. Ardından, çevredeki kasları sinirden çıkarın ve enjeksiyon desteği için sterilize edilmiş bir spatula kullanarak dışarı doğru çekin.
Şimdi, kanser hücresi süspansiyonu ile doldurulmuş bir şırınga alın ve paralel olarak sinire enjekte edin. Sinirdeki gözle görülür bir çıkıntı, enjeksiyonun başarılı olduğunu doğrularken, enjeksiyon bölgesinin etrafındaki herhangi bir sızıntı, başarısız bir girişime işaret eder. Kısaca, hücrelerin sinir içinde stabilize olmasına izin verin.
Ardından iğneyi nazikçe geri çekin ve kasları yeniden konumlandırın. Daha sonra, insizyonu dikin. Farenin iyileşmesine izin verin. Sonunda, kanser hücreleri enjeksiyon bölgesinden omuriliğe doğru göç etmeye başlar ve perinöral istilayı doğrular.
Ameliyattan bir gün önce, 8 haftalık bir erkek veya dişi C57BL / 6J farenin sırt tarafındaki uyluk kemiği uzunluğu boyunca kürkü cerrahi bir kesme makinesi veya kimyasal epilasyon maddesi ile çıkarın. Ameliyat günü, sahneyi dezenfekte edin, fareleri bir indüksiyon odasında% 2 izofluran kullanarak uyuşturun ve anestezi altında kuruluğu önlemek için gözlere veteriner merhemi sürün.
Ağırlığa uygun miktarda analjezik subkutan olarak enjekte edin ve bir fareyi cerrahi alandaki bir burun konisine aktarın. Cerrahi işlem boyunca ısı desteği sağlanır. Anestezi uygulanmış fareyi ventral tarafına yerleştirin ve enjekte edilecek uzuvda hafif bir gerginlik oluşturmak için her bir uzuvu hipoalerjenik bantla nazikçe sabitleyin.
Enjeksiyon bölgesini betadin çubukla temizleyin, ardından tekrar% 70 alkol ile temizleyin. Bu işlemi iki kez daha tekrarlayın ve ameliyat bölgesinde gevşek saç kalmadığından emin olun. Son adım olarak, cerrahi bölgeye betadin solüsyonu uygulayın. Steril eldivenleri giydikten ve steril örtüyü yerleştirdikten sonra, örtünün altındaki kesiyi yapmadan önce ayak parmağınızı sıkıştırmak için özel bir steril alet kullanın.
Ardından, uyluk kemiğinin yaklaşık 2 milimetre altında ve paralel olarak 1 santimetrelik bir kesi yapmak için steril küçük bir makas kullanın. Altındaki kasları ortaya çıkarmak için cildi forseps ile yanlamasına geri çekin. Gluteus maximus ve biceps femoris kaslarını fasyal bir düzlem boyunca ayırın ve altındaki siyatik siniri ortaya çıkarın. Künt diseksiyon kullanarak siniri çevredeki kaslardan kurtarın.
Peletten 3 mikrolitre kanser hücresini steril 10 mikrolitrelik bir şırıngaya çekin. Destek için enjeksiyon noktasında sinirin altına küçük bir metal spatula yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu ile görüntüleme yaparken iğneyi sinire paralel tutarak sinirin içine sokun. Sinirin arkasından delinmemeye dikkat edin.
Hücreleri 5 saniye boyunca yavaşça sinire enjekte edin. Enjeksiyon alanında bir ampul oluşumu, iyi bir enjeksiyonu gösterir. İğneyi nazikçe çıkarmadan önce geri akışı en aza indirmek için iğneyi 3 saniye yerinde bırakın. Siyatik sinirdeki kanser hücrelerinin uygun şekilde enjekte edilmesi çok önemlidir. Hücreler sinirin dışına enjekte edilirse, istila tutarlılığı zarar görür. Ancak, pratik ve deneyim ile bu çok nadirdir.
Enjeksiyondan sonra, siniri orijinal konumuna geri getirin ve siniri üstteki kaslarla kaplayın. Fareleri uygun analjezi ile tedavi edin ve ardından cildi 5-0 naylon dikişlerle kapatın. Fareyi gözlem için tek başına temiz bir kafese koyun ve sternal yaslanmayı sürdürmek için yeterli bilinci yeniden kazanana kadar iyileşme sırasında ısı desteği sağlayın.