Murin Modelinde Terapötik Nöral Kök Hücrelerin (NSC'ler) İntranazal Dağıtımı: Onkolitik Virüs Yüklü NSC'lerin Beyin Tümörü Taşıyan Fare Modeline Tümör Hedefli Verilmesi İçin Bir Prosedür

Başlamak için, bir nöral kök hücre veya NSC kültürünü düşük oksijen koşullarına tabi tutun. Bu ön koşullandırma, gelişmiş NSC proliferasyonunu ve tümör hedefleme yeteneklerini kolaylaştırır. Daha sonra, NSC'leri hasat edin ve istenen şartlı olarak çoğalan onkolitik virüs konsantrasyonu ile tedavi edin. Virüsleri hücrelere yüklemek için kuluçkaya yatırın.

Şimdi, bağlanmamış virüsleri kaldırmak için kültürü santrifüjleyin. Virüs yüklü NSC'leri uygun bir tamponda yeniden askıya alın. Bu arada, burun deliklerine daha kolay erişim için anestezi uygulanmış beyin tümörü taşıyan bir fareyi sırtüstü pozisyonda konumlandırın. Virüs yüklü NSC'leri farenin her bir burun deliğine kısa aralıklarla tekrarlayarak dikkatlice uygulayın.

Farenin iyileşmesine izin verin. Burun boşluğunda intranazal olarak uygulanan NSC'ler beyne girmek için kan-beyin bariyerini atlar. Beynin içinde, virüs bu önceden koşullandırılmış hücreler içinde çoğalır ve kendisini bağışıklık sisteminden koruyarak tümör bölgesine göç eder. Zamanla, NSC'lerden salınan viral partiküller, tümör hücreleri üzerinde aşırı eksprese edilen spesifik hücre yüzeyi reseptörleriyle etkileşime girer ve bağlanır.

Virüs içselleştirmesini takiben, bu şartlı olarak çoğalan virüsler tercihen tümör hücrelerinde çoğalır ve hücre lizizine neden olur. Parçalanmış tümör hücreleri, çevredeki tümör hücrelerini enfekte eden viral partiküller salgılar ve bu da bir dizi enfeksiyon ve tümör hücresi lizisine yol açar. Hücre lizisi, tümör antijenlerini açığa çıkararak tümör hücrelerine karşı bir bağışıklık tepkisini aktive eder.

İnsan nöral kök hücrelerini onkolitik virüs ile yüklemek için, kök hücreleri standart adenovirüs transfeksiyon protokollerine göre hücre başına 50 koşullu adenovirüs viral partikülü replikasyonu ile oda sıcaklığında 2 saat boyunca periyodik dokunma ile enfekte edin. Daha sonra, bağlanmamış viral partikülleri çıkarmak için hücreleri üç kez taze ortamla yıkayın ve intranazal teslimat için hücreleri steril tuzlu su içinde askıya alın.

Hücreler deneysel olarak uygun şekilde değiştirildiğinde, anestezi uygulanmış tümör taşıyan hayvanları sırtüstü pozisyonda bir ısı yastığı üzerine temiz bir örtü üzerine yerleştirin ve burun deliklerini dik açıda tutmak için başların altına yastıklı bir yastık yerleştirin. Yastık malzemesi, çapraz hayvan kontaminasyonunu önlemek için alkolle silinebilir plastik veya tek kullanımlık rulo kağıt havlu olmalıdır.

Fareler pozisyondayken, ilk farenin her bir burun deliğine ilgilenilen deneysel insan nöral kök hücre popülasyonunun 2 mikrolitresini dağıtmak için bir mikropipet kullanın ve bir sonraki hücre hacmini uygulamadan önce damlacığın aspirasyonunu görsel olarak onaylayın. Teslimatı sırayla her fareye tekrarlayın. Ardından, 5 dakika bekleyin ve bir sonraki hücre turunu uygulayın. Dört hücre turunun tümü uygulandığında, hayvanları tam iyileşmeye kadar izlemeli bir kurtarma odasına yerleştirin.

• Neural Stem Cells (NSCs) - Preconditioned cells exposed to low oxygen for improved proliferation.
• Cell Washing Procedure - A method to remove unbound entities, in this context, virus.
• Stem Cell Flow Chart - A graphical representation to outline the stem cell procedures.
• Murine Stem Cell Virus - An oncolytic virus used in research for its tumor-targeting properties.
• Stem Cell Delivery - Process of injecting stem cells (here, into nostrils).

• Introduce NSCs - Neural stem cells enhanced for tumor-targeting (e.g., NSCs).
• Key Concepts - Overview of oncolytic virus utilization within NSCs (e.g., theory of stem cell delivery).
• Underlying Mechanisms - NSCs carry virus to brain tumors, leading to cell lysis (e.g., mechanisms of murine stem cell virus).
• Connect to Experiment - Experiment uses virus-loaded NSCs injected into mice nostrils, targets brain tumor.

• [Question 1] What are neural stem cells and how do they target tumors?
• [Question 2] How does the process of cell washing work?
• [Question 3] What role does the murine stem cell virus play in tumor destruction?

• Practical Applications - Invasive brain tumor treatments (e.g., using NSCs).
• Industry Impact - Potential benefits for cancer treatment sectors (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improved life quality of brain tumor patients (e.g., via better treatment options).
• Link to Scientific Advancements - A step forward in oncolytic virus research and NSC technology.