SB Aracılı Transpozisyon Kullanılarak Glioblastoma İndüksiyonu: SB Plazmidinin Yenidoğan Fare Beynine Transpozon Aracılı Entegrasyonu Kullanılarak Yeni Fare Modeli Oluşturmak İçin Bir Teknik

Plazmit karışımı içeren bir tüp alarak başlayın. Uyuyan güzel veya SB transpozon plazmidi, iki ters çevrilmiş tekrar dizisi arasına sıkıştırılmış, insan kaynaklı glioblastoma indükleyen bir onkogen içeren transpoze edilebilir bir element taşımak üzere tasarlanmıştır. Ek olarak, bu karışım, bir transpozaz enzimi eksprese eden elemente sahip bir SB transpozaz plazmidi içerir.

Şimdi, tüpe uygun bir transfeksiyon reaktifi ekleyin. Enjeksiyon karışımını bir mikroiğne ile donatılmış bir şırıngaya aspire edin. Ardından, anestezi uygulanmış bir fare yavrusunu stereotaksik bir çerçeve üzerinde yüzüstü pozisyonda sabitleyin. Kraniyal dikişleri bulmak için yavrunun baş bölgesini görselleştirin. Mikroiğneyi kraniyal sütürlerin üzerine yerleştirin.

Karışımı, beyin parankimi içindeki bir boşluk olan lateral ventriküle enjekte edin. Daha sonra, çözelti, transfeksiyon reaktif moleküllerinin hücrelere plazmitlerin girişini kolaylaştırdığı beyin parankimine dağılır. Hücrenin içine girdikten sonra, transpozaz plazmidi, ters çevrilmiş tekrar dizilerini tanıyan ve transpozon elementini eksize eden transpozaz enzim moleküllerini ifade eder.

Transpoze edilebilir element DNA'sı daha sonra kendisini yavrun