Fare Beyin Damarlarının İzole Edilmesi: Murin Beyin Örneğinden Sağlam Damarları İzole Etmek İçin Bir Protokol

Beyin damarları, sıkıca bağlı endotel hücrelerinden oluşan bir tabaka ile çevrilidir. Bu hücrelerin etrafında, perisitler ve astrositler gibi hücresel bileşenlerle birlikte bir bazal zar bulunur.

Beyin damarlarını çevredeki nöronlardan ve glial hücrelerden izole etmek için, bir homojenizasyon tamponuna batırılmış fare beyni içeren bir beher alın. Küçük parçalar halinde kıyın. Beyin dokusunu ayrıştırmak için homojenize edin, nöronları, glial hücreleri ve beyin damarlarını serbest bırakın. Bu tedavi aynı zamanda nöronları çevreleyen miyelin kılıfını da bozar.

Homojenatı bir tüpe aktarın ve kapları peletlemek için santrifüjleyin. Nöronlar ve glial hücreler gibi daha hafif bileşenler süpernatantta kalırken, miyelin peleti çevreleyen yoğun bir arayüz tabakası oluşturur.

Süpernatanı atın ve uygun yoğunluk gradyan ortamında bağlı miyelin tabakası ile damar peletini yeniden süspanse edin. Damarları peletlemek için santrifüjleyin ve süpernatantın tepesinde yüzen yağ açısından zengin bir miyelin bandı elde edin. Miyelin bandını kullanılmış ortamla birlikte çıkarın ve peleti yeni bir tamponda yeniden süspanse edin.

Ham kap hazırlığını, kapların içinden geçemeyeceği kadar küçük bir filtre içer