İn Vitro Fagositoz Testi: Gerçek Zamanlı Astrosit Aracılı Sinaptozom Fagositozunu İncelemek İçin Canlı Görüntüleme Tabanlı Bir Yöntem

Sinaptozomlar, sinaptik veziküller açısından zengin, izole nöronal fraksiyonlardır. Bu sinaptozomlar, fagositoz olarak bilinen bir süreçle beyindeki bir bağışıklık hücresi popülasyonu olan astrositler tarafından yutulur.

Astrosit aracılı fagositozu in vitro olarak incelemek için, tek katmanlı bir astrosit içeren bir kültür plakası alarak başlayın. Şimdi, plakaya pH indikatörü konjuge sinaptozom süspansiyonu ekleyin. Bu indikatör boya, yalnızca düşük bir pH'ta floresan özelliğine sahiptir. Plakayı istenen süre boyunca inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, sinaptozomun dış zarında bulunan fosfatidilserin veya PS, astrosit zarı üzerindeki karşılık gelen PS reseptörlerine bağlanmasına izin verir. Bu, sinaptozomların tabana yerleşmesini kolaylaştırır. Harcanan ortamı plakadan bağlanmamış sinaptozomlarla birlikte aspire edin.

Daha sonra, plakayı fagositozu teşvik edici faktörlerle destekleyin ve inkübe edin. Ardından, bir floresan mikroskobu kullanarak plakayı görüntüleyin. Yüzeye bağlandıktan sonra, astrositler sinaptozomları yutar ve fagozomlara girmelerine neden olur. Fagozomların içine girdikten sonra, düşük pH, indikatör boya moleküllerinin parlak bir şekilde floresan olmasına neden ol