Civciv Embriyo Serebellar Dilimlerinin Ex Vivo Elektroporasyonu: Granüler Hücre Gelişimini Görselleştirmek için Yeşil Floresan Proteini Kodlayan Plazmid DNA'yı Tanıtma Yöntemi

Serebellar granül hücreleri, beynin en bol bulunan nöron türüdür. Dış granüler tabaka, EGL, yalnızca, iç granüler tabakayı, IGL'yi oluşturmak için farklılaşan ve içe doğru göç eden granüler hücre öncülerinden, GCP'lerden oluşur.

Granüler hücre gelişimini görselleştirmek için, bir Petri kabının tabanına bir anot takarak bir elektroporasyon odası hazırlayın. Elektrodu kaplamak için kültür ortamı ekleyin. Şimdi, orta kaplı elektrot üzerine bir kültür eki yerleştirin. Civciv embriyosu beyincik dilimlerini sagital oryantasyonda kültür ekine aktarın.

Sagital düzlem, hedef katman-EGL'nin farklı beyincik katmanlarına karşı tanımlanmasını sağlar. EGL üzerine bir GFP plazmit DNA'sı içeren viskoz bir boya çözeltisi ekleyin. GFP plazmit DNA'sı, hücre sitoplazması içinde homojen bir şekilde dağılan ve canlı hücre görüntülemeyi mümkün kılan yeşil bir floresan proteini kodlar.

Daha sonra, ortama EGL'nin yakınına bir katot yerleştirin, ancak doğrudan dokunun üzerine değil. Ardından, farklı EGL bölgelerine birden fazla elektrik darbesi uygulayın. Elektrik darbeleri, hücre zarında geçici gözeneklere neden olarak hücrelerin plazmit DNA'sını almasına izin verir. Daha sonra, plazmit DNA, granüler hücre