$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Farelerde, beyincik ön beynin tabanında bulunur ve bir orta hat - vermis ile birleştirilen iki lateral yarım küreden oluşur. Beynin nöronlarının çoğunu içeren beyincik, nörolojik çalışmalar için hayati önem taşır.
Beyincik dilimleri oluşturmak için, kafası kesilmiş bir fare kafası ile başlayın. Foramen magnum'a makas yerleştirin - kafatası tabanındaki açıklık. Kafatasını nazikçe kesin ve çıkarın. Sonra, beyni dışarı çevirin ve optik ve trigeminal sinirleri kesin. Beyni, sırt tarafı yukarı bakacak şekilde soğutulmuş bir diseksiyon ortamına bırakın. Arka beyni diğer beyin kısımlarından ayırın.
Ardından, beyinciği ayırmak için alttaki serebellar pedinkülleri - beyincik ve beyin sapı arasındaki bağlantı - kesin. Meninksleri beyincikten çıkarın. Beyinciğe, doğrayıcı bıçağına dik bir doku doğrayıcı platformuna dikkatlice yerleştirin. Şimdi, uygun kalınlıktaki doku dilimlerini inceleyin. Hemen dilimleri ıslatın ve diseksiyon ortamını içeren Petri kabına geri aktarın.
Dilimleri vermisten ayırın ve tanımlayın. Seçilen dilimleri, uygun bir büyüme ortamı içeren bir kültür plakasındaki iyi bir eke aktarın. Daha ileri deneyler için diseke edilmiş serebellar dilimlerin yapısal ve fonksiyonel bütünlüğünü korumak için kültürü inkübe edin.
Başlamak için, foramen magnumuna nazikçe küçük bir makas sokun ve yana doğru bir yanal kesi yaparak kafatasını kesin ve ardından kafa kafatasının etrafını kesin. Kafatasının dorsal kısmını almak için, kafatasının dorsal kısmını dikkatlice kaldırmak için ince bir düz forseps kullanın.
Ardından, ventral kafatası ile beyin arasındaki forsepsleri dikkatlice yerleştirin. Beyni nazikçe dışarı çevirin ve optik ve trigeminal sinirleri küçük bir makasla kesin. Daha sonra, beynin yerçekimi ile düşmesine yardımcı olmak için buz gibi soğuk diseksiyon ortamı içeren 60 milimetrelik bir hücre kültürü kabının hemen üzerinde kafatasının başını veya sırt kısmını baş aşağı çevirin.
İnce forseps kullanarak, beyni sırt tarafı yukarı bakacak ve ventral taraf aşağı yatacak şekilde yönlendirin. Binoküler mikroskop altında, ön beyin tarafındaki beyni hareketsiz hale getirmek için ince düz forseps kullanın. Ardından, arka beyni beynin geri kalanından ayırın. Beyinciğini arka beynin geri kalanından ayırmak için beyinciğin altındaki serebellar pedinkülleri kesin.
Beyincik izole edildikten sonra, meninksleri dikkatlice koparmak için ince düz forseps kullanın. Beyinciği ince kavisli forseps ile nazikçe tutun ve sırt tarafı yukarı bakacak şekilde doğrayıcı tıraş bıçağına dik olan plastik platforma yerleştirin. Daha sonra, 1 mililitrelik bir pipete bağlı steril ince uçlu bir pipet ucu ile beyincik çevresindeki fazla diseksiyon ortamını aspire edin. Daha sonra, bir doku kıyıcı ile beyinciğin 300 mikrometre kalınlığında sagital bölümleri dilimlenir.
Daha sonra, dilimlenmiş beyincik üzerine yavaşça bir damla diseksiyon ortamı ekleyin. Ardından, 1 mililitrelik pipete bağlı geniş delikli bir pipet ucu ile dilimlenmiş beyinciği yavaşça aspire edin ve buz gibi soğuk diseksiyon ortamı içeren 60 milimetrelik hücre kültürü kabına geri aktarın.
Ardından, tek tek dilimleri ayırmak için iki ince düz forseps kullanın. Daha sonra, 1 mililitrelik pipete bağlı geniş delikli bir pipet ucu ile, bir miktar diseksiyon ortamı ile birlikte vermisten seçilen dört dilimi 6 oyuklu bir plakanın bir kültür ekine aktarın. İnce uçlu bir pipet ucu kullanarak dilimlerin etrafındaki fazla diseksiyon ortamını çıkarın.