Omurilik Nöron İzolasyonu: İn Vitro Çalışmalar için Yenidoğan Omurilik Nöronlarını İzole Etmek İçin Bir Yoğunluk Gradyan Prosedürü

Omurilik nöronlarını izole etmek için, yenidoğan bir farenin vertebral kolonunu alın ve bir Petri kabına yerleştirin. Omuriliği serbest bırakmak için vertebral kolonu salin tamponu ile yıkayın. Hücre sağkalımını desteklemek için omuriliği soğuk nöronal ortama aktarın.

Daha sonra, omuriliği kıyın ve parçaları taze nöronal ortam içeren bir tüpe aktarın. İklimlendirme için tüpü bir çalkalayıcı su banyosunda inkübe edin. İnkübasyondan sonra, harcanan ortamı çıkarın ve sindirim ortamını ekleyin. Sindirim enzimleri, hücreleri gevşetmek için doku matrisini parçalar.

Doku parçalarını pipete aspire ederek ezme işlemi gerçekleştirin ve bileşenleri hızla boşaltın, tek tek hücreleri süspansiyona bırakın. Daha sonra, bu süspansiyonu yoğunluk gradyan ortamı ve santrifüj içeren bir tüpe aktarın.

Santrifüjlemeyi takiben, tüpün yüzeysel tabakası doku kalıntıları içerir. İlk katman oligodendrositleri ve astrositleri içerir. İkinci ve üçüncü katmanlar nöronları içerir ve üçüncü katman en yüksek saflığa sahiptir. Son olarak, pelet mikroglial hücreler içerir.

Üçüncü katmanı yeni bir tüpe toplayın ve yoğunluk gradyan ortamını seyreltmek için nöronal ortam ekleyin. Nöronları peletlemek için santrifüjleyi